计时双基练(四十一) 微生物的培养与应用(计时：45分钟 满分：100分)一、选择题(每小题4分，共48分)1．下列有关微生物培养的叙述中，不正确的是( )A．获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染B．单菌落的分离是消除污染杂菌的通用方法C．培养基都必须使用高压蒸汽灭菌法灭菌D．倒置平板防止培养皿盖上的冷凝水滴落解析 本题考查微生物的培养，意在考查考生的识记能力和实验操作能力，难度较小。培养基都需要灭菌，但要根据实际情况选择灭菌的方法，如果培养基的营养物质在高温条件下易分解，则不能使用高压蒸汽灭菌。答案 C2．下列有关培养基和菌种鉴定的叙述不正确的是( )A．植物组织培养常用的是固体培养基B．可利用固体培养基上菌落的特征来判断和鉴别细菌的类型C．利用刚果红培养基上是否形成透明圈来筛选纤维素分解菌D．在无氮培养基中加入酚红指示剂鉴定尿素分解菌解析 在只以尿素作为氮源的培养基中加入酚红指示剂鉴定尿素分解菌。答案 D3．下列对灭菌和消毒的理解不正确的是( )A．灭菌是指杀灭环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子B．消毒和灭菌实质上是完全相同的C．接种环用灼烧法灭菌D．常用灭菌方法有灼烧灭菌法、干热灭菌法、高压蒸汽灭菌法解析 消毒是使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)，灭菌则是使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。答案 B4．下列关于测定亚硝酸盐含量的操作，错误的是( )A．质量浓度为4mg/mL的对氨基苯磺酸溶液呈酸性B．对氨基苯磺酸溶液和N1萘基乙二胺盐酸盐溶液，应避光保存C．质量浓度为5μg/mL的亚硝酸钠溶液应保持弱碱性环境D．制备样品处理液，加入氢氧化铝的目的是中和氢氧化钠解析 8\n从实验原理、操作步骤及注意事项上进行分析。对氨基苯磺酸溶液和N1萘基乙二胺盐酸盐溶液都呈酸性，为保证其稳定性，应低温密闭保存；亚硝酸钠标准液配制过程中应加入NH4Cl缓冲液，保持弱碱性环境以免形成亚硝酸挥发；制备样品处理液，加入氢氧化铝的目的是使滤液中色素脱色，使滤液变得无色透明。答案 D5．用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时( )①可以用相同的培养基 ②都需要使用接种针进行接种 ③都需要在火焰旁进行接种 ④都可以用来计数活菌A．①②B．③④C．①③D．②④解析 平板划线法或稀释涂布平板法都使用固体培养基，故①正确；平板划线法采用接种环进行操作，而稀释涂布平板法采用涂布器进行操作，故②错误；纯化时，要进行无菌操作，需要在火焰旁接种，避免空气中的微生物混入培养基，故③正确；平板划线法一般用于分离而不是计数，故④项错误。答案 C6．用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是( )A．未接种的选择培养基B．未接种的牛肉膏蛋白胨培养基C．接种了的牛肉膏蛋白胨培养基D．接种了的选择培养基解析 将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，因此，用牛肉膏蛋白胨培养基作为对照。对照实验遵循的原则之一是单一变量，所以与选择培养基一样接种、培养。答案 C7．下列关于微生物培养和利用的叙述不正确的是( )A．利用稀释涂布平板法既能分离微生物也能对微生物进行计数B．接种时连续划线的目的是将聚集的菌种逐步稀释获得单个菌落C．以尿素为唯一氮源且含酚红的培养基可选择和鉴别尿素分解菌D．用大白菜腌制泡菜的过程中亚硝酸盐含量变化是先减少后增加解析 稀释涂布平板法可以用于分离微生物以及对微生物计数；接种时要连续划线，这样可以获得单个菌落；大白菜腌制过程中开始时细菌大量繁殖，亚硝酸盐含量增加，一般腌制10d后亚硝酸盐含量下降。答案 D8．下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是( )A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板8\nB．取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1mL，分别涂布于各组平板上C．将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24～48小时D．确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数解析 确定对照组无菌后，选择菌落数在30～300的平板进行计数，D项错；A项是培养基的灭菌方法，B项设置了一系列对照实验，C项是细菌的培养方法，A、B、C三个选项均正确。答案 D9．分离纤维素分解菌的实验过程中操作有误的是( )A．经选择培养后将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上B．富集培养这一步可省略，但培养的纤维素分解菌少C．经稀释培养后，用刚果红染色D．对照组可用同样量的培养液涂布到不含纤维素的培养基上解析 经选择培养后，再经稀释，才能将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上；富集培养可省略；经稀释培养后，用刚果红染色；设置对照能证明经富集培养的确得到了欲分离的微生物。答案 A10．下表表示在不同培养基中细菌的生长繁殖情况。(A、B、C、H、I、J、K、M为培养基的成分，“＋”表示生长，“－”表示不生长)，请分析下列哪种物质细菌不能合成( )A．HB．IC．KD．M解析 培养基是按照微生物的生长需要，用人工方法配制而成的营养物，其中有些是各种微生物都必需的，大多数情况下按微生物特殊营养要求配制的培养基，称选择培养基。比较细菌能够生长的培养基的添加物，凡添加了物质K的培养基，细菌都能生长，反之则不能生长，说明物质K是细菌不能合成的。答案 C11．将细菌放在固体培养基上培养，它会繁殖并形成菌落(如图甲)。某实验小组想检验A、B两种抗生素的杀菌作用，下列实验方案最合适的是( )8\n解析 本实验的目的是检验A、B两种抗生素的杀菌作用，应设置不加抗生素的对照组和分别加A、B两种抗生素的实验组。答案 C12．三个培养皿中分别加入10mL不同的培养基，然后接种相同的大肠杆菌样液。培养36h后，计算菌落数，结果如下表。下列选项正确的是( )培养皿培养基成分菌落数Ⅰ琼脂、葡萄糖35Ⅱ琼脂、葡萄糖、生长因子250Ⅲ琼脂、生长因子0A.该实验采用的是液体培养基B．该实验采用平板划线法接种C．Ⅰ和Ⅲ对照，说明大肠杆菌的生长不需要生长因子D．Ⅱ和Ⅲ对照，说明大肠杆菌的生长需要葡萄糖解析 该培养基加入了琼脂，故为固体培养基，对微生物进行计数，宜采用稀释涂布平板法(而不是平板划线法)接种；稀释涂布平板法是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，一个菌落代表一个单细胞；Ⅰ与Ⅲ对照，说明大肠杆菌生长需要葡萄糖，但不能证明是否需要生长因子；Ⅱ和Ⅲ对照，自变量是有无葡萄糖，说明大肠杆菌的生长需要碳源如葡萄糖。答案 D二、非选择题(共52分)13．(14分)下表是筛选异养型细菌的培养基配方。KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2gFeCl30.1gX1g维生素微量琼脂15g8\n将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL(1)苯胺是致癌物质，土壤中有分解苯胺的异养型细菌，此培养基中的成分X除为目的菌提供能源外，还能提供________(写全得分)，该培养基从作用看属于________培养基。制备固体培养基时调节pH在________步骤后；对培养基进行灭菌的常用方法是________。(2)如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，则获得图B效果的接种方法是________。运用图A所示接种方法统计的菌落常常比活菌的实际数目________。在探究“酵母菌种群数量变化”实验中，已知每个计数室由25×16＝400个小格组成，容纳液体的总体积为0.4mm3，观察到图中计数室所示a、b、c、d、e5个中格共有酵母菌80个，则1mL样液中约有酵母菌________个。(3)在以尿素为唯一氮源的培养基中加________可初步鉴定该种细菌能够分解尿素，原理用方程式表示为_____________；在筛选能够分解纤维素的微生物过程中，常用到________染色法。答案 (1)碳源和氮源 选择 溶化 高压蒸汽灭菌法(2)平板划线法 低 107(3)酚红指示剂 CO(NH2)2＋H2OCO2＋2NH3 刚果红14．(18分)请回答下列有关微生物的一些问题。(1)微生物的分布：微生物主要分布在富含________的土壤表层；不同微生物对pH的要求不同，细菌常生活在酸碱度________的潮湿土壤中。(2)微生物的消毒和灭菌：在菊花组织培养中，对外植体常用酒精和________进行消毒。在微生物培养中，对培养基常用________方法进行灭菌。对于空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能________。如果要检测灭菌是否彻底，可以采用的方法是：_______________________________________。(3)微生物的应用：在葡萄酒的自然发酵过程中，运用吸附在葡萄皮上的野生酵母菌发酵生产酒精，请写出该过程的化学反应式：____________________________________。在果醋制作时，运用醋酸菌在________和糖源充足时，将糖分解成醋酸。(4)微生物的接种：微生物接种的方法很多，最常用的是____________和____________。8\n(5)微生物的计数：根据培养基上出现的菌落数目和稀释倍数计算得出的细菌数目往往比实际的数目低，原因是_______________。(6)微生物的鉴定：为检测尿素分解菌的存在与否，在以尿素为唯一氮源的________(填“选择”或“鉴别”)培养基中加入____________指示剂，如果存在尿素分解菌，则指示剂将变________色。解析 (1)微生物主要分布在有机质丰富的土壤表层，细菌常生活在酸碱度接近中性的潮湿土壤中。(2)植物组织培养时，对外植体常用酒精和氯化汞消毒，对培养基常用高压蒸汽灭菌法灭菌；紫外线能使蛋白质变性，还能损伤DNA的结构；可通过在适宜的温度、无菌条件下放置灭菌过的培养基看其是否有菌落产生来确定培养基灭菌是否彻底。(3)醋酸菌为需氧型生物。(4)最常用的微生物接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法。(5)因一个菌落可由多个连在一起的细菌形成，所以计算得出的细菌数一般低于实际数目。(6)用选择培养基筛选目的菌，加入酚红指示剂检测尿素分解菌，若存在尿素分解菌，指示剂变红色。答案 (1)有机质 接近中性(2)氯化汞 高压蒸汽灭菌 损伤DNA的结构 将灭菌过的培养基在适宜的温度、无菌条件下放置一段时间，观察培养基上是否有菌落产生(3)C6H12O62C2H5OH＋2CO2＋能量 有氧(4)平板划线法 稀释涂布平板法(5)当两个或多个细菌连在一起时，平板上形成的只是一个菌落(6)选择 酚红 红15．(20分)研究人员测试新抗生素对某种链球菌的杀菌效果，这种链球菌能引起人的咽喉感染，将此链球菌分别接种在三个培养皿中，在2号培养皿中放入一片浸过新型抗生素的圆纸片，3号作为对照，三只培养皿如下图。(1)请对本实验作出假设：________________________。(2)“细菌喜荤，霉菌喜素”，所以该细菌培养基一般用________来配制，制备培养基的操作顺序是________。(用下列字母排序)8\na．倒置培养基b．计算和称量c．灭菌d．调pHe．溶解和熔化(3)为能彻底消灭培养基中的其他微生物，科学家研究出间隙灭菌法。其程序是：第一天，将培养基在100℃下维持30min，然后在36～37℃下放置24h；第二天、第三天重复第一天的操作。请分析：①培养基在100℃下维持30min的目的是________________。②在36～37℃下放置24h后再加热的目的是______________。③怎样证明间隙灭菌法的效果？_________________________。(4)对照组培养皿3中的圆片应作怎样的处理？______________________________________________________。(5)利用________对培养皿1进行该链球菌接种，把聚集的菌种逐步分散到培养基的表面。待长出菌落后，利用无菌绒布将培养皿1中的菌落转移到培养皿2和3中，转移过程中要注意______________。(6)三只培养皿都放在37℃的温度条件下培养24h，其中1号培养皿的变化结果如下图，在2号培养皿中画出假设的变化结果。解析 (1)根据题图看出，该实验是探究这种新型抗生素的抑菌效果。(2)链球菌是细菌，应用蛋白胨、酵母菌提取物(如酵母膏)培养。(3)间隙灭菌法培养基在100℃下维持30min能杀灭细菌，但芽孢生命力强，可能未被杀死，在36～37℃下放置24h后，由于温度适宜，芽孢萌发，再加热容易杀死。杂菌是否全被杀死，通过对培养基进一步培养判断，若再生长出菌落，说明还有杂菌。(4)对照组3应不加任何抗生素。(5)对培养皿1进行接种用平板划线法或稀释涂布平板法。将培养皿1中的菌落转移到培养皿2和3中，各菌落对应位置应相同，绒布不能转动。(6)2号培养皿中间放入浸过新型抗生素的圆纸片，围绕圆纸片周围无菌落。答案 (1)这种新型抗生素对细菌生长无影响；或这种新型抗生素对细菌的生长有抑制作用(写出一种即可)(2)蛋白胨和酵母提取物 bedca8\n(3)①杀死活的微生物 ②杀死24h中由细菌芽孢萌发而生长的微生物 ③将培养基处于37℃下放置3～5d，如仍无微生物生长，证明培养基已达到灭菌效果(4)将圆片在不添加任何抗生素的无菌水中浸泡一段时间(5)平板划线法或稀释涂布平板法 不能转动绒布(6)8
