活页作业(一) 微生物的培养与应用一、选择题因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，而样品稀释度无论多高都很难使其中的细菌都单个分布于培养基上，故计数结果比实际值低。答案：B2．用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时( )①可以用相同的培养基 ②都需要使用接种针进行接种 ③都需要在火焰旁进行接种 ④都可以用来计数活菌A．①② B．③④C．①③D．②④解析：平板划线法或稀释涂布平板法都使用固体培养基，故①正确；平板划线法采用接种针进行操作，而稀释涂布平板法采用涂布器进行操作，故②错误；纯化时，要进行无菌操作，需要在火焰旁接种，避免空气中的微生物混入培养基，故③正确；平板划线法一般用于分离而不是计数，故④错误。答案：C3．细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽灭菌、酒精消毒、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌( )A．接种环、手、培养基B．高压锅、手、接种环C．培养基、手、接种环D．接种环、手、高压锅答案：C4．通过实验测定土壤中的细菌数量，下列与此操作有关的叙述中，不正确的是( )A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板B．取104、105倍的土壤稀释液0.1mL，分别涂布于各组平板上6\nC．将培养皿倒置，37℃恒温培养24～48小时D．选择菌落数在300个以上的培养皿进行计数解析：检测土壤中细菌总数，用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板，取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1mL，分别涂布于各组平板上，将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24～48小时，在确定对照组无菌后，选择菌落数在30～300的平板进行计数。答案：D5．(2022·赤峰质检)下表为某培养基的配方，有关叙述正确的是( )成分牛肉膏葡萄糖K2HPO4伊红美蓝青霉素琼脂蒸馏水含量10g10g2g0.4g0.065g1万单位适量1000mLA.能在此培养基上生长的大肠杆菌，拟核上有抗青霉素的基因B．此培养基是天然鉴别培养基C．此培养基可以用来检测自来水中细菌含量是否符合饮用水标准D．此培养基可以用于选育转基因大肠杆菌菌种的基因工程的操作过程中解析：此表表示鉴定大肠杆菌的合成培养基。抗性基因一般位于大肠杆菌的质粒上，而不是拟核上；此培养基只能用来检测自来水中大肠杆菌含量是否符合饮用水标准。答案：D6．下列有关刚果红染色法的叙述，不正确的是( )A．刚果红可以在细菌菌落形成前倒平板时加入B．刚果红可以在菌落形成后加入C．刚果红在菌落形成前倒平板时加入，加入的刚果红不需要灭菌D．在菌落形成后加入刚果红时，刚果红不需要灭菌答案：C二、非选择题6\n7．(2022·南昌模拟)尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，同学们试图探究土壤中微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌(目的菌)。培养基成分如下表所示，实验步骤如下图所示。请分析回答问题。KH2PO4Na2HPO4MgSO4·7H2O葡萄糖尿素琼脂1.4g2.1g0.2g10g1g15g将上述物质溶解后，用自来水定容到1000mL(1)此培养基能否用于植物组织培养？________________________________________________________________________，理由是_______________________________________________________________。(2)培养基中加入尿素的目的是________，这种培养基属于________培养基。(3)“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的________和________，实验需要振荡培养，原因是_____________________________________________________。(4)转为固体培养时，常采用________(方法)接种，获得单菌落后继续筛选。(5)下列材料或用具中：①培养细菌用的培养基与培养皿；②玻棒、试管、锥形瓶和吸管；③实验操作者的双手。需要灭菌的是：________；需要消毒的是：________。(填序号)(6)在进行分离分解尿素的细菌实验时，A同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。A同学的实验结果产生的原因可能有________(填序号)。①由于土样不同 ②由于培养基污染 ③由于操作失误 ④没有设置对照(7)在以尿素为唯一氮源的培养基中加入________，细菌合成的________将尿素分解为氨，pH增高，使指示剂变红色。解析：(1)微生物与植物生长所需的营养不完全相同，培养微生物的培养基不能用于组织培养。(2)培养基中加入尿素作唯一氮源，分解尿素的微生物可生长，这种培养基属于选择培养基。(3)“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自尿素和葡萄糖。实验需要振荡培养增加溶氧量。(4)在固体培养基上接种用稀释涂布平板法或平板划线法。(5)灭菌要彻底消灭微生物及其芽孢，如①和②。实验操作者的双手要消毒。6\n(6)A同学从培养基上筛选出的菌落数与其他组相比，原因可能是土样不同，培养基污染，操作失误等。与是否设置对照无关。(7)由于细菌合成的脲酶将尿素分解为氨，pH增高，故在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂将变红。答案：(1)不能 缺少植物激素(或缺少植物需要的各种营养) (2)筛选目的菌 选择(3)尿素 葡萄糖 为目的菌提供氧气(4)稀释涂布平板法(平板划线法)(5)①② ③ (6)①②③ (7)酚红指示剂 脲酶8．如图为分离并统计分解纤维素的微生物的实验流程，据此回答有关问题：→→→(1)要从富含纤维素的环境中分离纤维素分解菌，从高温热泉中寻找耐热菌，这说明________________________________________________________________________。(2)某同学根据需要，配制了纤维素分解菌的培养基如下，整个实验过程严格执行无菌操作。纤维素粉 NaNO3 Na2HPO4·7H2O KH2PO4 5g 1g 1.2g 0.9gMgSO4·7H2O KCl 酵母膏、水解酪素 0.5g 0.5g 适量如果将其中的纤维素粉换成____________________，菌落数____________________，即可说明选择培养基的作用。(3)接种微生物最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，本实验宜采用________法，原因是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。6\n9．纤维素分解菌能够产生纤维素酶分解纤维素。回答下列问题：(1)在筛选纤维素分解菌的过程中，通常用________染色法，这种方法能够通过颜色反应直接对纤维素分解菌进行筛选。甲同学在实验时得到了如图所示的结果，则纤维素分解菌位于( )A．③ B．①②C．②③D．①②③(2)乙同学打算从牛胃中分离纤维素分解菌并计数，与分离醋酸菌相比，进行培养时除了营养不同外，最主要的实验条件差别是________________________________________，该同学采用活菌计数法统计的菌落数目往往比活菌的实际数目________。(3)丙同学在提取和分离纤维素酶的过程中，为了抵制外界酸和碱对酶活性的影响，采取的措施是向提取液和分离液中添加________。若探究纤维素酶活性的最适温度，如何设置对照？________________________________________________________________________。解析：(1)刚果红与纤维素形成的红色复合物在纤维素被分解后将不再形成，则在培养基上出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。(2)牛胃是一个厌氧的环境，所以其中的纤维素分解菌与需氧的醋酸菌培养条件有所不同。因是活菌计数法，所以部分死亡菌无法计数。另外当两个或多个细菌连在一起时平板上只观察到一个菌落，所以偏小。(3)探究最适温度可设置一系列的温度梯度相互对照，其他无关变量要适宜。答案：(1)刚果红 A (2)保证无氧环境 小(低)(3)缓冲溶液 不同的温度梯度之间相互对照10．氯苯化合物是重要的有机化工原料，因其不易降解，会污染环境。某研究小组依照下列实验方案(图1)筛选出能高效降解氯苯的微生物SP1菌。培养基配方如表1。6\n2可知，SP1菌在__________培养条件下最早停止生长，其原因是________________________________________________________________________。解析：配制固体培养基时应在液体培养基的成分中再加入琼脂作为凝固剂。在配制培养基时应先调节pH，后进行灭菌，防止灭菌后在调节pH的过程中污染培养基。据表可知，培养基Ⅰ为牛肉膏蛋白胨培养基，包括碳源、氮源、水、无机盐和生长因子，适用于多种微生物的培养。培养基Ⅱ不加牛肉膏和蛋白胨，以硝酸铵为氮源，可以选择出以硝酸铵为氮源的微生物，是选择培养基。在营养缺乏、环境恶劣时，微生物可以形成休眠体——芽孢，来度过不良环境。据图2可知，SP1菌在20mg/L氯苯培养条件下菌体数最早达到最大值，即最早停止生长，原因是在培养基Ⅲ中，氯苯是唯一碳源，由于20mg/L氯苯培养条件氮源最少，因此也最早被耗尽，使SP1菌停止生长。答案：(1)琼脂 (2)先调pH，后灭菌 (3)通用 选择 硝酸铵 (4)芽孢 (5)20mg/L氯苯 碳源最早耗尽6
