此卷只装订不密封班级姓名准考证号考场号座位号此卷只装订不密封班级姓名准考证号考场号座位号2022届高三二轮综合卷生物（四）注意事项：1．答题前，先将自己的姓名、准考证号填写在试题卷和答题卡上，并将准考证号条形码粘贴在答题卡上的指定位置。2．选择题的作答：每小题选出答案后，用2B铅笔把答题卡上对应题目的答案标号涂黑，写在试题卷、草稿纸和答题卡上的非答题区域均无效。3．非选择题的作答：用签字笔直接答在答题卡上对应的答题区域内。写在试题卷、草稿纸和答题卡上的非答题区域均无效。4．考试结束后，请将本试题卷和答题卡一并上交。第Ⅰ卷（选择题）一、选择题：本题共6小题，每小题6分，共36分。在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的。1．木耳长时间泡发可能会滋生椰毒假单胞菌，该细菌产生的米酵菌酸毒性强、耐高温，且无特效药可治疗，致死率极高。下列叙述正确的是（ ）A．该细菌合成米酵菌酸的相关基因在RNA上B．该细菌加工和分泌米酵菌酸需要高尔基体参与C．泡好的木耳应在低温下保存，并及时烹饪食用D．木耳炒熟后食用能降低米酵菌酸中毒的可能性【答案】C【解析】椰毒假单胞菌属于原核生物，遗传物质是DNA，只有核糖体一种细胞器。A．细菌的遗传物质为DNA，该细菌合成米酵菌酸的相关基因在DNA上，A错误；B．椰毒假单胞菌属于原核生物，不含高尔基体，B错误；C．泡好的木耳应在低温下保存，低温可降低细菌繁殖的速度，最好及时食用，C正确；D．根据题意可知，该细菌产生的米酵菌酸毒性强、耐高温，故炒熟后，该细菌仍然存在，故炒熟后食用，不能降低米酵菌酸中毒的可能性，D错误。故选C。2．生物膜将真核细胞分隔成多个不同的小区室，使得细胞内能够同时进行多种生物化学反应，而不会相互干扰。下列叙述正确的是（ ）A．不同种类生物膜的基本支架的化学成分是不同的B．不同种类的生物膜有些是独立存在的有些是相互联通的C．细胞内的囊泡只能来自于内质网或高尔基体D．细胞分化程度越高，其生物膜系统就越发达【答案】B【解析】A．不同种类生物膜的基本支架都是磷脂双分子层，故它们化学成分是相同的，A错误；B．不同种类的生物膜有些是独立存在的有些是相互联通的，如细胞膜、内质网膜和核外膜是相互联通的，B正确；C．细胞膜可通过胞吞作用将物质运入细胞，也可以产生囊泡，C错误；D．生物膜的发达程度与细胞分化程度无关，D错误。故选B。3．人类肿瘤细胞细胞质中含大量“甜甜圈”般的独立于染色体外存在的环状DNA（ecDNA），其上普遍带有癌基因。癌细胞内ecDNA可大量扩增且癌基因能高效表达。下列叙述正确的是（ ）A．ecDNA容易复制和表达，可能与其呈裸露状态不与蛋白质结合易解旋有关B．每个ecDNA有2个游离的磷酸基团C．该DNA分子中（A+T）/（C+G）=1D．ecDNA通过复制后能平均分配至子细胞中，保持遗传的稳定性【答案】A【解析】A．ecDNA可大量扩增且癌基因能高效表达，所以其A容易复制和表达，可能原因是DNA不与蛋白质结合，从而减少复制和表达时受到的束缚，A正确；B．一般情况下每条链有一个有个游离的脱氧核糖一个游离的磷酸基团，但环状DNA分子无游离磷酸基团和游离脱氧核糖，B错误；C．DNA分子中（A+G）/（T+C）=1，（A+T）/（C+G）不固定，C错误；D．ecDNA是独立于染色体外存在的环状DNA，要染色体上DNA（核DNA）才能平均分配到子代细胞中，D错误。故选A。4．细胞因子是一种可辅助免疫细胞产生对病原体起杀伤作用的物质。新冠病毒感染可引起多种细胞因子在短时间内迅速增加，让免疫系统短时间内火力全开，对自身组织产生伤害（即细胞因子风暴）。科研人员进行了相关研究，结果如下：结果1：细胞因子风暴可以上调ACE2、EGFR等新冠病毒感染所需的宿主蛋白含量；结果2：抑制宿主细胞内的RPK1激酶活性，可以抑制新冠病毒感染引发的细胞因子风暴；结果3：新冠病毒的RNA依赖性RNA聚合酶（NSP12）是激活RIPK1激酶的主要因子。下列叙述正确的是（ ）A．细胞因子风暴引起自身组织损伤，属于免疫缺陷B．适量使用RIPK1激酶抑制剂可减轻新冠肺炎症状C．NSP12是由新冠病毒自身编码的并在其核糖体上合成的蛋白质D．新冠病毒可以通过细胞因子风暴形成负反馈，使病毒更容易感染人体【答案】B【解析】A．根据题意分析，新型冠状病毒引起的“细胞因子风暴”是多种细胞因子在短时间内迅速增加，让免疫系统短时间内火力全开，对自身组织产生伤害，是免疫系统功能过强的一种过激反应而非免疫缺陷，A错误；B．由题文“5
抑制宿主细胞内的RPK1激酶活性，可以抑制新冠病毒感染引发的细胞因子风暴”可知，适量使用RIPK1激酶抑制剂可减轻新冠肺炎引起的细胞因子风暴症状，B正确；C．新冠病毒无细胞结构不能合成蛋白质，NSP12是由新冠病毒自身编码的并在宿主细胞的核糖体上合成的蛋白质，C错误；D．新冠病毒引起的肺炎病人体内，可能会出现细胞因子风暴，即在机体产生免疫应答消灭病毒的同时，免疫细胞分泌的细胞因子会活化更多免疫细胞，活化后的免疫细胞又会产生更多细胞因子，形成正反馈，使病毒更容易感染人体，D错误。故选B。5．如图是某草原生态系统中，甲、乙两个种群数量变化的动态模型。下列叙述错误的是（ ）A．乙进入早期，其种群数量增长大致呈“J”型曲线B．图中a点的纵坐标值代表乙种群的环境容纳量C．该生态系统的相对稳定与甲和乙之间的负反馈调节有关D．甲和乙之间的信息传递往往是双向的【答案】B【解析】A．由分析可知，乙是捕食者，乙进入早期，缺乏天敌且生存压力小，其种群数增长大致呈“J”型曲线，A正确；B．环境容纳量是在环境条件不受破坏情况下，一定空间中所能维持的种群最大数量，图中a是最大数量，但是环境不能维持该数量，故a不是环境容纳量，B错误；C．图中甲和乙之间为捕食关系，当甲遭受乙的捕食后，甲就会增强其再生能力，尽可能减缓种群数量的下降，这种调节方式为负反馈调节，以此来维持生态系统的稳定，C正确；D．在生物和生物之间信息传递往往是双向进行，甲被捕食者和乙捕食者之间的信息传递往往是双向的，D正确。故选B。6．雄性不育在植物杂交时有特殊的育种价值。油菜为两性花，其雄性不育（不能产生可育的花粉）性状受两对独立遗传的等位基因控制，其中M基因控制雄性可育，m基因控制雄性不育，r基因会抑制m基因的表达（表现为可育）。下列判断正确的是（ ）A．基因型为MmRr的植株自交后代中雄性可育植株有3/16B．基因型为mmRr的植株的自交后代中雄性可育∶雄性不育=1∶3C．用基因型为mmRR的植株作为母本进行杂交实验前要进行去雄处理D．基因型为Mmrr的植株自交子代均表现为雄性可育【答案】D【解析】由题意知，油菜花受两对独立遗传的等位基因控制，因此遵循自由组合定律。由于m基因控制雄性不育性状，r基因会抑制m基因的表达，所以mmR_为雄性不育，M___、mmrr为可育。A．基因型为MmRr的植株自交后代中，雄性不育植株mmR_有1/4×3/4=3/16，雄性可育植株有13/16，A错误；B．基因型为mmRr的植株为雄性不育，所以不能自交，B错误；C．基因型为mmRR的植株为雄性不育，所以作为母本进行杂交前，不需要做去雄处理，C错误；D．基因型为Mmrr的植株自交，产生的子代为__rr，都是雄性可育，D正确。故选D。第Ⅱ卷（非选择题）二、非选择题：包括必考题和选考题两部分。第7~10题为必考题，每个试题考生都必须作答。第11、12题为选考题，考生根据要求作答。（一）必考题：此题包括4小题，共39分。7．（8分）AMP-PCP能与细胞膜上的ATP跨膜受体蛋白结合，科研人员用AMP-PCP溶液处理三七叶片，测定其净光合速率，结果如图1所示。请分析回答下列问题。（1）由图1可知，随着AMP-PCP浓度增大，叶片的净光合速率__________。保卫细胞中的K+浓度变化是引起气孔运动的主要原因，K+进入保卫细胞内，可导致气孔开放。科研人员据此推测AMP-PCP影响叶片净光合速率的原因是AMIP-PCP限制了ATP运输到细胞外，导致气孔开放程度__________，从而抑制了光合作用的__________阶段。（2）要验证上述推测是否正确，可用__________溶液处理三七叶片作为实验组，用蒸馏水处理三七叶片作为对照进行实验，测定叶片的气孔开放程度和净光合速率。若实验组的气孔开放程度和净光合速率均__________对照组，则证明上述推测成立。（3）图2为适宜条件下三七幼苗叶绿体中某两种化合物的变化。若T1时突然降低CO2浓度，则物质A、B分别指的是__________（填“[H]”“ADP”“C3”或“C5”）。【答案】（1）降低（1分）下降（1分）暗反应（1分）（2）ATP（1分）大于（2分）（3）C5和[H]（2分）【解析】（1）据图分析，随着AMP-PCP浓度增大，叶片的净光合速率逐渐降低，原因可能是AMP-PCP能与细胞膜上ATP跨膜受体蛋白结合，限制了ATP运输到细胞外，导致气孔开放程度下降，导致光合作用的暗反应中的二氧化碳供应不足，抑制了暗反应的进行。5
（2）要验证（1）推测（AMP-PCP能与细胞膜上ATP跨膜受体蛋白结合，限制了ATP运输到细胞外）是否正确，自变量是ATP溶液，可用ATP溶液处理三七叶片，以蒸馏水作为对照试验，测定叶片的气孔开放程度和净光合作用速率，如果实验组的气孔开放程度和净光合速率均大于对照组，则推测正确。（3）若T1时刻突然降低CO2浓度，则CO2与C5的固定下降，另一方面，C3的还原继续进行，继续生成C5，故C5含量增加；由于生成的C3下降，C3的还原下降，[H]消耗下降，有积累，另一方面，光反应继续生成[H]，故[H]含量增加，故A代表C5，B代表[H]。8．（10分）为研究家兔血糖平衡调节机制，某兴趣小组给实验兔静脉注射不同剂量的胰岛素，测得血糖的补充速率和消耗速率如下图所示。完成下列各题：（1）正常情况下，机体补充和消耗血糖的主要途径依次是___________。当血浆胰岛素浓度为40μU·mL-1时，在较长时间内血糖浓度不会维持相对稳定，其原因在于___________。（2）为验证胰岛素可通过作用于下丘脑神经元抑制胰高血糖素的分泌，某同学设计了以下实验，请完善表中的实验操作。组别处理方式观测指标对照组在家兔下丘脑神经元周围施加适量生理盐水测定施加试剂②______（填“前”“后”或“前后”）血液中胰高血糖素的浓度实验组在家兔下丘脑神经元周围施加①______为使实验结果更明显，实验过程中应将家兔血糖维持在比正常浓度__________（填“稍高”或“稍低”）的水平。（3）I型和II型糖尿病家兔体内分别含有针对胰岛B细胞和胰岛素受体的抗体。从免疫学角度分析，上述两种糖尿病属于__________病。对上述家兔注射适量胰岛素溶液，推测II型糖尿病家兔血糖浓度不会下降，判断依据是__________。【答案】（1）补充血糖的途径主要是机体对食物的消化和吸收或肝糖原分解成葡萄糖，消耗血糖的途径被组织细胞摄取进行氧化分解（2分）胰岛素浓度为40μU/mL时，血糖补充速率是1mg/kg·min，血糖消耗速率3.8mg/kg·min（2分）（2）等量的胰岛素（1分）前后（1分）稍低（1分）（3）自身免疫（1分）II型糖尿病产生的原因是抗体针对胰岛素受体，受体细胞对胰岛素不敏感（2分）【解析】（1）正常情况下，机体补充血糖的主要途径是依赖于机体对食物的消化和吸收或肝糖原分解成葡萄糖（饥饿状态），消耗血糖的主要途径是被组织细胞摄取并氧化分解。当胰岛素浓度为40μU/mL时，血糖补充速率是1mg/kg·min，血糖消耗速率3.8mg/kg·min，血糖浓度不能维持相对稳定。（2）胰岛素可通过作用于下丘脑神经元抑制胰高血糖素的分泌，为了验证该现象，则实验自变量是是否向下丘脑神经元注射胰岛素，因变量是胰高血糖素含量，实验思路是：将小鼠随机分成两组，一组在其下丘脑神经元周围施加适量的胰岛素溶液，另一组施加等量的生理盐水，测定并比较施加试剂前后血液中胰高血糖素的浓度。实验的检测指标是胰高血糖素的浓度，在血糖浓度较低时，胰高血糖素分泌增多，为了突出实验结果，实验过程中应将血糖浓度维持在稍低水平。（3）糖尿病产生的原因是抗体针对了自身的结构，所以是自身免疫病；II型糖尿病产生的原因是抗体针对胰岛素受体，所以受体细胞对胰岛素不敏感，注射适量胰岛素溶液，胰岛素起不到作用，II型糖尿病家兔血糖浓度不会下降。9．（11分）粮食安全是国家安全的一部分，中国有着上千年的农耕文明，在农业生产活动中积累了大量的实践经验和农业知识。请回答下列问题：（1）垄作是重要耕作方式，春季易旱、夏季易涝地区采用较普遍。垄作可以提高田间透光条件，使土壤受光面积增大，白昼吸热块，夜晚散热快。垄作促进光合作用，提高产量原因有____________________________________________________（写出两点）。（2）“追肥在雨前，一夜长一拳。”农耕者一般在雨前追化肥的因为是___________________________________________。农作物在不同生长阶段需肥不同，一般在营养发育阶段施用氮肥较多，在生殖生长期需要磷肥等较多，据此推测，磷肥可以促进植物________________________。（3）“勤除草，谷粒饱。”农田杂草过多会与农作物竞争___________________降低产量。生长素类似物2，4-D等可以作为除草剂去除单子叶作物农田中的双子叶杂草，原因是__________________________________________________。（4）无土栽培可以有效解决农耕土地资源不足的困境。最早的水培法是将植物根系长期直接浸入培养液中，但植物根部易腐烂死亡，原因是____________________________。5
【答案】（1）增大了光照面积；垄台有利于作物根系生长和对土壤中矿质元素的吸收；昼夜土温温差大，有利于光合产物积累（2分）（2）肥料中的矿质元素需要溶解在水中以离子状态才能被植物的根系吸收（2分）植物的开花率、结实率；促使植物正常生长发育，缩短果实的成熟所需时间（2分）（3）阳光、二氧化碳、土壤中的矿质元素等（1分）生长素具有两重性，且双子叶植物比单子叶植物对生长素更敏感，杂草一般是双子叶植物，作物一般是单子叶植物（2分）（4）根部长期直接浸入培养液中，氧气缺乏，进行无氧呼吸产生酒精，导致植物根部酒精中毒，出现腐烂死亡（2分）【解析】（1）根据题干“垄作可以提高田间透光条件，使土壤受光面积增大，白昼吸热快，夜晚散热快”，可知促进光合作用，提高产量原因有：增大了光照面积；垄台土层很厚，土壤之间间隙大，不容易出现土壤板结现象，有利于作物根系生长和对土壤中矿质元素的吸收；昼夜土温温差大，有利于光合产物积累。（2）因为肥料中的矿质元素需要溶解在水中以离子状态才能被植物的根系吸收，因此农耕者一般在雨前追化肥。在生殖生长期需要磷肥等较多，据此推测，磷肥可以促进植物的开花率、结实率；促使植物正常生长发育，缩短果实的成熟所需时间。（3）农田杂草和农作物都是植物，需要进行光合作用，农田杂草过多会与农作物竞争阳光和二氧化碳，以及土壤中的矿质元素等，使农作物的光合作用下降，从而降低产量。生长素的作用具有两重性，即低浓度起促进作用，高浓度起抑制作用，不同植物对生长素的敏感性不同，一般情况下，双子叶植物比单子叶植物对生长素更敏感，杂草一般是双子叶植物，作物一般是单子叶植物，因此2，4-D等可以作为除草剂去除单子叶作物农田中的双子叶杂草。（4）根部长期直接浸入培养液中，氧气缺乏，根部进行无氧呼吸产生酒精，导致植物根部酒精中毒，出现腐烂死亡。10．（12分）果蝇的细眼（B）对粗眼（b）为显性，灰身（D）对黑身（d）为显性，长翅（E）对残翅（e）为显性。回答下列问题：（1）若控制细眼与粗眼、灰身与黑身、长翅与残翅的基因均位于常染色体上。现有品种甲（BBDDee）、乙（bbDDEE）、丙（BBddEE）和丁（bbddee），进行了如表所示两组实验：组合亲本F1生殖细胞组合一甲×丁BDe︰Bde︰bDe︰bde=4︰1︰1︰4组合二丙×丁BdE︰Bde︰bdE︰bde=1︰1︰1︰1①利用组合一的F1自交__________（填“能”或“不能”）验证基因的自由组合定律，理由是________________________________________。②分析组合二可知，基因E、e和基因B、b位于__________（填“同一”或“不同”）对同源染色体上。利用F1自交所得F2中，杂合子占__________。（2）若控制细眼与粗眼、长翅与残翅的基因均位于常染色体上，而控制灰身（D）与黑身（d）的基因位置不确定，为了确定这对等位基因位于常染色体上还是X染色体上，某研究小组让一只灰身雄性果蝇与一只灰身雌性果蝇杂交，然后统计子一代果蝇的表现型及数量比，结果为灰身︰黑身=3︰1，根据这一实验数据，还不能确定D和d是位于常染色体上还是X染色体上，需要对子一代进行更详细的统计和分析。请说说你的想法：____________________。【答案】（1）不能（2分）由组合一中得出结论：B、b和D、d位于同一对同源染色体上，不遵循自由组合定律；对等位基因E、e而言，因为F1产生的生殖细胞只含有e基因，因此利用组合一的F1自交无法验证基因的自由组合定律（2分）不同（2分）3/4（2分）（2）如果这对等位基因位于常染色体上，依据子一代的表现型，可以推知亲代的基因型为Dd和Dd，子一代灰身︰黑身为3︰1；如果这对等位基因位于X染色体上，依据子一代的表现型，可推知亲代的基因型为XDXd和XDY，子一代灰身︰黑身也为3︰1，但黑身果蝇全为雄性。因此，要确定等位基因是否位于X染色体上，还应统计黑身果蝇是否全为雄性（答案合理即给分）（4分）【解析】（1）①组合一中，纯种品种甲和丁杂交，子一代产生的四种配子及比例为BDe︰Bde︰bDe︰bde=4︰1︰1︰4，则子一代的基因组成为BbDdee，配子之比不是1︰1︰1︰1，说明基因B/b和基因D/d位于同一对同源染色体上，不遵循基因的自由组合规律；对等位基因E、e而言，因为F1产生的生殖细胞只含有e基因，因此利用组合一的F1自交无法验证基因的自由组合定律。所以利用组合一的F1自交不能验证基因的自由组合定律。②组合二中，纯种品种丙和丁杂交，子一代产生的四种配子BdE︰Bde︰bdE︰bde=1︰1︰1︰1，则子一代的基因组成为BbddEe，产生的四种配子之比是1︰1︰1︰1，说明基因B/b或D/d和基因E/e位于不同对同源染色体上，其遗传遵循基因的自由组合规律；F1BbddEe自交所得F2中，纯合子占的比例为1/2×1/2＝1/4，则杂合体的比例为3/4。（2）根据杂交实验结果不能判断控制灰身与黑身的基因位于X染色体还是常染色体。如当控制灰色与黑色的基因位于常染色体时，灰身（Dd）×灰身（Dd）→灰身（3D_）︰黑身（1dd）；当相关基因位于X染色体上时，灰身（XDY）×灰身（XDXd）→灰身（XDXD）、灰身（XDXd）、灰身（XDY）、黑身（XdY），灰身（XDXD、XDXd、XDY）︰黑身（XdY）=3︰1。要确定D和d是位于常染色体上还是X染色体上，需要对后代进行更详细的统计和分析，即统计后代雌雄个体的表现型，如果没有性别差异，黑身雌雄都有，则基因位于常染色体上；如果有性别差异，黑身全是雄果蝇，则基因位于X染色体上。5
（二）选考题：共15分。请考生从2道题中任选一题作答，并用2B铅笔将答题卡上所选题目对应的题号右侧方框涂黑，按所涂题号进行评分；多涂、多答，按所涂的首题进行评分；不涂，按本选考题的首题进行评分。11．【选一-生物技术实践】（15分）聚乙烯醇（PVA）为致癌物，是一种有机化合物，化学式为[C2H4O]n，难以降解，存在于化工污水中。请回答下列问题：（1）科研人员希望筛选出能高效分解PVA的细菌，他们配置的培养基所需的营养物质主要有水、无机盐、__________四类，该培养基以PVA为唯一碳源，原因是________。从功能上分类，该培养基属于__________培养基。（2）若要对分离得到的PVA分解菌进行计数，应采用____________法进行接种。（3）科研人员查阅资料发现：PVA分解菌能产生PVA酶分解PVA，PVA与碘作用时能产生蓝绿色复合物，当PVA被分解时蓝绿色复合物消失，形成白色透明斑。为了进一步鉴定分离出的细菌是否为PVA分解菌，于是他们在培养PVA分解菌的培养基中除了加入必需的营养物质外还加入_________。若培养基上出现____________，则说明该菌可能为PVA分解菌。（4）科研人员研究过程中在培养基中发现了两种不同的PVA酶，为分离这两种酶他们用到了凝胶色谱法，该方法先洗脱出来的是相对分子质量较大还是较小的酶，原因是什么？______________。【答案】（除特别说明外，每空2分）（1）碳源和氮源只有能分解利用PVA的菌株才能生存繁殖选择（2）稀释涂布平板法（3）碘白色透明斑（4）先分离出的是相对分子质量较大的酶。原因是相对分子质量较大的蛋白质，不进入凝胶颗粒内部，路径短、速度快（3分）【解析】（1）培养基所需的营养物质主要有水、无机盐、碳源和氮源四类，要从土壤中筛选出能高效分解PVA的细菌，应采用以PVA作为唯一碳源的选择培养基，这样只有能分解利用PVA的菌株才能生存繁殖。（2）若要对分离得到的PVA分解菌进行计数，应采用稀释涂布平板法进行接种。（3）由题干信息可知，PVA分解菌能产生PVA酶分解PVA，PVA与碘作用时能产生蓝绿色复合物，故要鉴定分离出的细菌是否为PVA分解菌，培养PVA分解菌的培养基中除了加入必需的营养物质外还需要加入碘用于鉴别PVA分解菌。若培养基上出现白色透明斑，则说明该菌可能为PVA分解菌。（4）要想分离不同的PVA酶需要用凝胶色谱法，相对分子质量较大的蛋白质，不进入凝胶颗粒内部，路径短、速度快，故该方法先洗脱出来的是相对分子质量较大的酶。12．【选三-现代生物科技】（15分）CBFI基因过量表达能提高拟南芥植株的抗寒性。苜蓿是包草料产业发展的主要草种，低温等逆境胁迫会导致苜蓿减产。科研人员从拟南芥植株中克隆得到冷诱导转录因子（AtCBF1）基因，通过转基因技术培育抗寒紫花苜蓿，以使苜蓿安全越冬和提高产量。回答不列问题：（1）在扩增AtCBF1基因的过程中，先根据________设计引物，再进行PCR扩增。扩增时，反应体系的初始温度设置在90~95℃的目的是______。PCR过程中需要使用______酶。（2）回收PCR产物并酶切后用_____将AtCBF1基因连接到T质粒上，以得到T-CBF1重组质粒。构建T-CBF1重组质粒时，同时使用BamHI和SacI进行双酶切的目的是_______。（3）将目的基因导入受体细胞，培育后筛选转化阳性的植株。若采用分子杂交技术检测转基因紫花苜蓿植株目的基因的转录水平，则需要将________片段制成探针。（4）为进一步研究转基因紫花苜蓿的抗寒机制，还需要进一步开展研究。请完成下列研究技术路线图：______。【答案】（除特别说明外，每空2分）（1）AtCBFI基因的核苷酸序列使目的基因DNA受热变性后解链为单链Taq（或热稳定DNA聚合）（2）DNA连接酶产生不同的黏性末端，使目的基因和质粒定向连接（3）放射性标记的AtCBFI基因（4）（3分）①植物组织培养②观察低温胁迫下植株生长状况【解析】（1）利用PCR技术扩增目的基因的前提，是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物，所以在扩增AtCBF1基因的过程中，先根据AtCBFI基因的核苷酸序列设计引物，再进行PCR扩增。扩增的过程是：目的基因DNA受热变性后解链为单链，引物与单链相应互补序列结合，然后在热稳定DNA聚合酶的作用下进行延伸，如此重复循环。所以扩增时，反应体系的初始温度设置在90~95℃的目的是使目的基因DNA受热变性后解链为单链，PCR过程中需要使用热稳定DNA聚合酶。（2）DNA连接酶是基因的“针线”，回收PCR产物并酶切后用DNA连接酶将AtCBF1基因连接到T质粒上，以得到T-CBF1重组质粒。构建T-CBF1重组质粒时，防止使用一种酶切导致目的基因自身环化，所以同时使用BamHI和SacI进行双酶切，产生不同的黏性末端，使目的基因和质粒定向连接。（3）分子杂交技术可检测目的基因是否转录出了mRNA，方法是从转基因生物中提取mRNA，用标记的目的基因作为探针，与mRNA杂交，如果显示出杂交带，则表明目的基因转录出了mRNA。所以若采用分子杂交技术检测转基因紫花苜蓿植株目的基因的转录水平，则需要将放射性标记的AtCBFI基因片段制成探针。（4）为进一步研究转基因紫花苜蓿的抗寒机制，可以通过植物组织培养获得大量转基因植株材料，并在低温胁迫下观察植株生长状况，检测紫花苜蓿的产量。5
