微生物的培养技术及应用\n课前自主预习案高效课堂课堂总结历届真题\n课前自主预习案\n素能目标★考向导航\n基础梳理——系统化知识点一微生物的基本培养技术1．培养基氮源无机盐液体培养基鉴别培养基pH氧气\n2．无菌技术化学药剂消毒法干热灭菌湿热灭菌外来杂菌\n3．微生物的纯培养（1）概念：由繁殖所获得的微生物群体是纯培养物，获得的过程就是纯培养。（2）过程：包括、灭菌、接种、分离和培养等步骤。（3）常用方法：法和法。单一个体纯培养物配制培养基平板划线稀释涂布平板\n（4）实例——酵母菌的纯培养平板划线高压蒸汽灭菌倒置未接种\n知识点二 微生物的选择培养和计数一、微生物的选择培养1．实验室中微生物筛选的原理人为提供有利于生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时其他微生物的生长。2．稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释后，将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基表面，进行培养。目的菌抑制或阻止\n（1）系列稀释操作移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管应离火焰1～2cm处。操作过程如下：\n（2）涂布平板操作序号图示操作①取0.1mL菌液，滴加到__________②将涂布器浸在盛有的烧杯中培养基表面酒精\n③将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8～10s④用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布_____（3）培养：待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板，放入30～37℃的中培养1～2d。均匀倒置恒温培养箱\n二、微生物的数量测定1．稀释涂布平板法（1）计数原理：当样品的时，培养基表面生长的一个，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的，就能推测出样品中大约含有多少活菌。（2）计数标准：为了保证结果准确，一般选择菌落数为的平板进行计数。（3）计数方法：通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数为、适于计数的平板。在下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出。（4）当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，统计结果一般用来表示。稀释度足够高单菌落菌落数30～30030～300同一稀释度平均值菌落数\n2．显微镜直接计数法（1）计数原理：利用特定的或，在显微镜下观察、计数，然后再计算一定体积的样品中微生物的数量。（2）优点：是一种常用的、的测定微生物数量的方法。（3）缺点：统计的结果一般是死菌数和活菌数的总和。细菌计数板血细胞计数板快速直观\n三、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数脲酶尿素\n基能过关——问题化一、判一判（判断正误并找到课本原话）（一）微生物的基本培养技术1．微生物在琼脂固体培养基表面或内部生长，可以形成肉眼可见的菌落。（选择性必修3P9正文）（ ）2．在培养霉菌时，需要将培养基调至中性或弱碱性。（选择性必修3P10正文）（ ）3．获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染。（选择性必修3P10正文）（ ）4．为了避免周围环境中微生物的污染，接种过程中许多操作都应在超净工作台并在酒精灯火焰附近进行。（选择性必修3P10正文）（ ）√√√×\n5．由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物。获得纯培养物的过程就是纯培养。（选择性必修3P11正文）（ ）6．倒平板过程中，将培养基倒入培养皿并盖上皿盖后，立即将培养皿倒置。（选择性必修3P12探究·实践）（ ）7．培养酵母菌时，可将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入适宜温度的恒温培养箱中培养24～48h。（选择性必修3P12探究·实践）（ ）√√×\n（二）微生物的选择培养和计数1．菌液的稀释度足够高时，培养基表面会获得单菌落。（选择性必修3P18正文）（ ）2．适于平板计数的菌落数范围为40～300。（选择性必修3P18正文）（ ）3．稀释涂布平板法计数时，统计的菌落数往往比活菌的实际数目少。（选择性必修3P18正文）（ ）4．稀释涂布平板法计数时，平板上的一个菌落就是一个细菌。（选择性必修3P20练习与应用2）（ ）√×√×\n二、连一连1．无菌技术的主要方法及适用对象\n2．以下几种选择培养基和鉴别培养基及其应用\n三、议一议【教材易漏拾遗】1．[选择性必修3P10正文拓展]消毒和灭菌都能杀死所有的微生物吗？提示：灭菌可杀死处理材料中的全部微生物(包括芽孢和孢子)，而消毒仅杀死部分微生物(一般不包括芽孢和孢子)。\n2．[选择性必修3P12“探究·实践”]延伸思考：（1）无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么作用？（2）为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？提示：还能有效避免操作者自身被微生物感染。提示：通过灼烧灭菌，可以防止瓶口的微生物污染培养基。平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面湿度也比较高，将平板倒置，既可以防止培养基表面的水分过快地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。\n（3）在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？（4）平板划线法在做第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？目的是什么？提示：不能。因为空气中的微生物可能在皿盖和皿底之间的培养基上滋生，可能会造成污染。提示：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。这样做的目的是将聚集的菌种逐步稀释分散以便获得单个菌落。\n3．[选择性必修3P17图1－7发掘]（1）涂布平板的所有操作为什么都应在火焰附近进行？提示：在酒精灯火焰旁操作可以保证无菌，防止杂菌污染。\n（2）如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，请分析：\n①获得图A效果和图B效果的接种方法分别是什么？②某同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成了一片，最可能的原因是什么？应当怎样操作才可避免此种现象？提示：获得图A效果的接种方法为稀释涂布平板法，获得图B效果的接种方法为平板划线法。提示：最可能的原因是菌液浓度过高或划线时在划下一区域前未将接种环灼烧灭菌；采取的措施是增大稀释倍数或每次划新区域前先将接种环灼烧灭菌。\n4．[选择性必修3P18探究·实践拓展]（1）分离分解尿素的细菌的选择培养基配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？（2）为什么只有能分解尿素的微生物才能在该培养基上生长？提示：碳源是葡萄糖，氮源是尿素。提示：分解尿素的微生物能合成脲酶，而脲酶可将尿素分解成氨，从而为微生物提供氮源。\n5．[选择性必修3P18正文发掘]（1）为什么测定活菌的数量不能用平板划线法？（2）利用稀释涂布平板法纯化分解尿素的细菌时，经培养后发现培养基上出现多种菌落，可能的原因有哪些？提示：由于在所划的线中，一般只有最后一次划线的末端才会形成只由一个细菌形成的菌落，而其他一些菌落往往由两个细菌或多个细菌繁殖而成，而在计数时一个菌落对应着一个细菌，这样在划线所得的平板中，菌落数目远低于活菌的实际数值，所以不能用平板划线法测定活菌数量。提示：出现杂菌污染的可能原因有：培养基制备过程中被杂菌污染；接种过程中，无菌操作不符合要求；系列稀释时，无菌操作不符合要求等。\n高效课堂\n考点一 微生物的基本培养技术任务驱动·探究突破任务1归纳培养基的种类和作用(1)按物理状态分类培养基种类特点用途液体培养基不加________工业生产半固体培养基加凝固剂(如琼脂)观察微生物的______、分类鉴定固体培养基加凝固剂(如琼脂)微生物的分离、鉴定，活菌计数，______保藏凝固剂运动菌种\n(2)按功能分类种类制备方法原理用途举例选择培养基培养基中加入某些________依据某些微生物对某些物质的特殊需求或抗性而设计从众多微生物中分离所需的微生物加入_______分离得到酵母菌和霉菌鉴别培养基培养基中加入某种________或________产生特定的颜色或其他变化鉴别不同种类的微生物用伊红美蓝培养基鉴别________菌化学物质青霉素指示剂化学药品大肠杆\n[师说拓展](1)培养基的配制原则①目的要明确：配制时应根据微生物的种类、培养目的等来确定配制的培养基种类。②营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。③pH要适宜：真菌为5.0～6.0，细菌所需pH为6.5～7.5，放线菌为7.5～8.5，故培养不同微生物所需pH不同。(2)培养基的营养构成①各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。②不同培养基还要满足不同微生物对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。\n(3)微生物对主要营养物质的需求特点①自养型微生物所需的主要营养物质是无机盐，碳源可来自大气中的CO2；氮源可由含氮无机盐提供，如硝酸盐等。②异养型微生物所需的营养物质主要是有机物，即碳源必须由含碳有机物提供，如糖类、脂肪酸等；氮源也主要由有机物提供，如尿素、牛肉膏等，部分异养型微生物也可以利用无机氮源。\n任务2比较消毒和灭菌方法条件结果常用方法应用范围消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部的_____微生物____消毒法日常用品巴氏消毒法不耐高温的液体________消毒法用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括______________灭菌法接种工具______灭菌法玻璃器皿、金属用具_______灭菌法培养基及容器部分煮沸化学药剂芽孢和孢子灼烧干热湿热\n任务3完善微生物的纯化培养(1)比较平板划线法和稀释涂布平板法的区别比较项目平板划线法稀释涂布平板法关键操作接种环在________培养基表面连续划线①一系列的梯度稀释②________操作注意事项每次划线前后均需灼烧接种环稀释度要足够高，为确保实验成功可以增加稀释度的范围菌体获取在具有显著的_____特征的区域挑取菌体从适宜稀释度的平板上的菌落中挑取菌体适用范围适用于好氧菌适用于______菌和兼性厌氧菌优点可以根据菌落的特点获得某种微生物的________菌落既可以获得单细胞菌落，又能对微生物计数缺点不能对微生物计数操作复杂，需要涂布多个平板固体涂布平板菌落厌氧单细胞\n(2)归纳概括平板划线操作的注意事项①灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。②第二次及其以后的划线操作总是从上一次划线末端开始，能使微生物的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。③划线时最后一区不要与第一区相连。④划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。\n⑤操作第一步即取菌种之前及每次划线之前都需要进行火焰灼烧灭菌，划线操作结束时，仍需灼烧接种环，每次灼烧的目的如下表：项目第一次操作每次划线之前划线结束目的杀死接种环上原有的微生物杀死____次划线后接种环上残留的菌种，使____次划线的菌种直接来源于____次划线的末端，使每次划线菌种数目减少杀死接种环上残存的菌种，避免微生物污染______和感染操作者上上下环境\n考向分类·对点落实考向一培养基及其制备方法分析1.[经典模拟]下表为某培养基的配方，下列叙述正确的是()A.从物理性质看，该培养基属于液体培养基；从用途看，该培养基属于选择培养基B．该培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白胨C．该培养基缺少提供生长因子的物质D．该培养基调节合适的pH后就可以接种使用成分蛋白胨葡萄糖K2HPO4伊红美蓝蒸馏水含量10g10g2g0.4g0.065g1000mL答案：B\n解析：分析表中成分可知，该培养基中没有凝固剂，为液体培养基，该培养基的营养成分齐全，但存在伊红、美蓝等鉴别物质，属于鉴别培养基，A错误；该培养基中的蛋白胨既是唯一的氮源，也是碳源，而葡萄糖是绝大多数生物最常利用的碳源，B正确；该培养基中存在的无机盐和蛋白胨中的某些物质可以看作是生长因子，C错误；对培养基调节完pH后还要进行灭菌处理等操作才能使用，D错误。\n2．[2022·安徽省黄山市高三“八校联考”]蓝白斑筛选是基因工程中筛选重组目的基因常用的一种方法，表现为培养基上出现蓝白颜色的菌落，可以通过颜色直接筛选重组菌。用于筛选的菌为β－半乳糖苷酶缺陷型菌株，这种宿主菌中编码β－半乳糖苷酶的部分缺失，不具有生物活性。用于蓝白斑筛选的质粒载体一般含有抗性基因和将宿主菌β－半乳糖苷酶缺失部分补全的序列，在这段序列中还含有多个限制性酶切位点，便于插入目的基因。β－半乳糖苷酶能够作用于一种无色化合物X-gal，使其变成蓝色物质。回答下列问题：\n(1)玻璃和金属材质的实验器材利用________方法灭菌。(2)培养基灭菌后，需要冷却到____℃左右时，才能倒平板。倒平板后，平板冷凝要将平板倒扣，其原因是_________________________________。(3)为防止杂菌污染，培养基中要添加________。蓝白斑筛选能成功，是因为培养基中添加了______。(4)最终培养基出现的白色的菌落是()A．目的基因和载体结合B．只含目的基因C．只含载体(5)若需要长期保存该菌种，可采用的方法是____________。干热灭菌50防止皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染抗生素X-galA甘油管藏法\n解析：(1)玻璃和金属材质的实验器材可用干热灭菌的方法进行灭菌。(2)培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时才能倒平板。倒平板后，平板冷凝要将平板倒扣，这样做可防止皿盖上的冷凝水落入培养基而造成污染。(3)为防止杂菌污染，培养基中要添加抗生素。β－半乳糖苷酶能够作用于一种无色化合物X-gal，使其变成蓝色物质，蓝白斑筛选能成功，是因为培养基中添加了X-gal。(4)由于用于蓝白斑筛选的质粒载体一般含有抗性基因和将宿主菌β－半乳糖苷酶缺失部分补全的序列，因此最终培养基中出现的白色的菌落是目的基因和载体结合的菌落，故选A。(5)若需要长期保存该菌种，可采用的方法是甘油管藏法。\n考向二无菌技术的操作3.[经典模拟]微生物培养过程中，要十分重视无菌操作。现代生物学实验中的许多方面也要进行无菌操作，以防止杂菌污染。请分析下列操作中错误的是()①煮沸消毒可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢②接种操作要在酒精灯火焰附近进行③无菌繁殖脱毒苗时，植物的外植体要进行消毒④家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄进行灭菌⑤培养基要进行高压蒸汽灭菌⑥加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌A．①③B．②④C．③⑤D．④⑥答案：D\n解析：无菌操作包括消毒和灭菌。需进行消毒处理的有植物的外植体及操作人员的双手等，需进行灭菌的有器皿、培养基、添加剂(指示剂或染色剂)等。煮沸可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢，属于消毒；为防止空气中杂菌的污染，接种时要在酒精灯火焰附近进行；家庭制作葡萄酒时所利用的微生物是葡萄表面的酵母菌，故不能灭菌；培养基常用高压蒸汽灭菌。故④⑥操作错误。\n4．(不定项选择)下列关于灭菌和消毒的理解，正确的是()A．灭菌是指杀灭环境中一切微生物的细胞、芽孢和孢子B．消毒和灭菌实质是相同的C．接种环用灼烧法灭菌D．常用的消毒方法有加热法、过滤法、紫外线法、化学药品法答案：ACD解析：灭菌是指采用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子，A正确；消毒是指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物，使其无害化，灭菌则是要将所有的微生物全部杀灭，以达到无菌的目的，灭菌一定可以达到消毒的目的，但消毒不一定能达到灭菌的效果，B错误；接种工具常用灼烧法灭菌，C正确；常用的消毒方法有加热法、过滤法、紫外线法、化学药品法，D正确。\n考向三大肠杆菌的纯化方法及过程分析5.[2022·甘肃兰州一中高三试题]平板冷却凝固后要将平板倒置，其目的是()A．利于大肠杆菌的生长B．防止空气进入C．利于培养基的冷却D．防止皿盖冷却水滴入培养基造成污染答案：D解析：平板冷却凝固后将平板倒置是为了防止皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染，D正确。\n6．[2022·河南省安阳市高三第一次调研]一个由英国伦敦帝国学院和芬兰图尔库大学的科学家组成的研究小组日前开发出一种通过大肠杆菌制造丙烷的新技术。科研人员欲对大肠杆菌进行研究和利用，首先要纯化大肠杆菌，请结合所学知识，回答下列问题：(1)纯化大肠杆菌首先需要制备牛肉膏蛋白胨固体培养基，其步骤是计算、称量、溶化、灭菌、_______。对培养基进行灭菌的方法是______________，检验培养基是否有杂菌污染的最有效的方法是______________________________。(2)可以估算出样品中大肠杆菌数量的接种方法是______________，用该方法得到的结果一般比实际值_____(填“偏大”或“偏小”)。倒平板高压蒸汽灭菌法将未接种的培养基放在恒温箱中培养稀释涂布平板法偏小\n解析：(1)纯化大肠杆菌首先需要制备牛肉膏蛋白胨固体培养基，其步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，对培养基进行灭菌的方法是高压蒸汽灭菌法。检验培养基有没有被杂菌污染，可选取未接种的培养基与接种样品的培养基同时在恒温箱中培养。如果在培养过程中未接种的培养基没有菌落生长，则说明培养基没有被杂菌污染；若未接种的培养基有菌落生长，则说明培养基被杂菌污染。(2)接种大肠杆菌的最常用方法是平板划线法和稀释涂布平板法，其中可以估算出样品中大肠杆菌数量的是稀释涂布平板法。由于两个或多个细胞连在一起，在平板上观察到的是一个菌落，因而该方法得到的结果一般比实际值偏小。\n(3)某实验小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养，结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是振荡培养能提高培养液中______的含量和营养物质的利用率。使用过的培养基及培养物必须经过________后才能丢弃，以防止培养物扩散。(4)如果要检测食品中是否含有大肠杆菌，需要在培养基中加入________(填物质)，以观察是否出现_____(填颜色)的菌落。氧气灭菌处理伊红美蓝黑色解析：(3)大肠杆菌的培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑温度、溶氧量、酸碱度和渗透压等条件；由于大肠杆菌对人和动物有一定的不利影响，所以对培养基和培养物要灭菌处理后才能丢弃。(4)鉴定大肠杆菌要用伊红美蓝培养基，若出现黑色菌落，则说明食品中有大肠杆菌。\n考向四微生物培养与分离的考查7.(不定项选择)漆酶属于木质降解酶类，在环境修复、农业生产等领域有着广泛用途。下图是分离、纯化和保存漆酶菌株的过程，相关叙述正确的是()A.生活污水中含有大量微生物，是分离产漆酶菌株的首选样品B．筛选培养基中需要加入漆酶的底物，通过菌落特征挑出产漆酶的菌落C．在涂布平板上长出的菌落，再通过划线进一步纯化D．斜面培养基中含有大量营养物，可在常温下长期保存菌株答案：BC\n解析：漆酶降解“木质”，则漆酶菌株多存在于“木质”丰富的场所，故生活污水中含有大量微生物，但不一定含有产漆酶的菌株，A错误；筛选培养基中需加入漆酶的底物，通过菌落特征挑出产漆酶的菌落，从而获得漆酶菌株，B正确；在涂布平板上长出的菌落，再通过划线进一步纯化，C正确；斜面培养基中含有大量营养物，可在低温下长期保存菌株，D错误。\n8．如图是微生物平板划线示意图，划线的顺序为1→2→3→4→5，下列说法正确的是()A．操作前要将接种环用酒精消毒B．划线操作须在酒精灯火焰附近进行C．只有在5区才可以得到所需菌落D．在2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环灭菌答案：B解析：在每次划线前后都要对接种环进行灭菌，接种环的灭菌方法应是在酒精灯火焰上灼烧，不能用酒精消毒；接种时划线操作是在酒精灯火焰附近进行；在5个区域中，只要有单个活细菌，通过培养即可获得所需菌落；每次划线前都要灼烧接种环，目的是杀死接种环上原有的微生物(第一次划线前)和上次划线结束后接种环上残留的菌种，使每次划线的菌种都来自上一次划线的末端，划线结束后灼烧接种环以防止污染环境和感染操作者。\n9．[2022·河北省保定市高三二模]冰箱并没有灭菌的功能，如果生冷食物长期放在冰箱这个密封的空间里，就会滋生细菌，使冰箱产生难闻的异味。某学习小组利用冰箱内烤肠作样本，在实验室做了微生物培养。请回答下列问题：(1)实验用到的培养基用_____________法灭菌，灭菌后的培养基需要倒置，原因是_________________________________。在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是_________________________。(2)为了观察培养的微生物种类及数量，需要用____________法进行接种，培养适宜时间后，培养基中出现多种形态和颜色不同的_____，说明烤肠样品中有多种微生物。高压蒸汽灭菌防止培养皿盖上的水珠落入培养基造成污染检测培养基平板灭菌是否合格稀释涂布平板菌落\n解析：(1)培养基需要灭菌，一般采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。灭菌后的培养基需要倒置，原因是防止培养皿盖上的水珠落入培养基造成污染，在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是检测培养基平板灭菌是否合格，如果有菌落，说明灭菌不合格，需要重新配制培养基并灭菌。(2)为了观察培养的微生物种类及数量，需要用稀释涂布平板法进行接种，在一定的稀释倍数的条件下，一个菌落就是一个菌体繁殖的后代。在特定的培养基上，不同微生物形成的菌落在形态、颜色、大小、表面粗糙还是光滑等是不同的，因此可以判断微生物的种类。\n(3)一般情况下，一定浓度的抗生素会杀死细菌，用含抗生素的滤纸片处理培养基上分离出的大肠杆菌，观察大肠杆菌生长状况，看滤纸片附近是否出现了抑菌圈，再从抑菌圈边缘的菌落上挑取细菌接种培养并重复以上抗生素处理，在连续培养几代后，抑菌圈的平均直径________(填“不变”、“变小”或“变大”)，原因是__________________________________________________________。变小抗生素对大肠杆菌起选择作用，随着培养次数增多，耐药菌的比例增大解析：通过抑菌圈的大小来确定杀菌能力，即抑菌圈越大杀菌能力越强。在细菌种群中，含有抗药性基因的个体毕竟只占极少数，抗生素会使细菌中不具抗药性的个体大量死亡而数量下降，抗生素的选择是定向的，故随着培养次数的增加，抑菌圈会变小，抗药性个体经过繁殖，其耐药菌的比例会增大。\n考点二 微生物的选择培养和计数任务驱动·探究突破任务1归纳概括微生物的筛选与鉴别方法(1)微生物的筛选方法单菌落挑取法利用________法或稀释涂布平板法接种到________培养基表面，直接根据微生物_____的特征利用单菌落挑取的方法获得目的微生物选择培养法利用______培养基对微生物进行选择培养，直接获得目的微生物鉴定培养法利用______培养基使目的微生物菌落呈现特有的特征，然后筛选目的微生物平板划线固体平板菌落选择鉴别\n(2)微生物的鉴别方法菌落特征鉴别法根据微生物在______培养基表面形成的菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等特征进行鉴别指示剂鉴别法如培养基中加入____________，培养某种微生物后，培养基变红说明该种微生物能够分解尿素染色鉴别法如利用_______染色法，根据培养基中出现以纤维素分解菌为中心的透明圈来筛选分解纤维素的微生物固体酚红指示剂刚果红\n任务2选择培养基与鉴别培养基的比较种类制备方法原理用途举例选择培养基培养基中加入某些化学物质依据____________________________而设计从众多微生物中分离所需的微生物加入_______分离得到酵母菌和霉菌鉴别培养基培养基中加入某种指示剂或化学药品依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中的特定试剂或化学药品反应，产生______________而设计鉴别不同种类的微生物____________可以鉴别大肠杆菌某些微生物对某些物质或环境条件的嗜好、抗性青霉素明显的特征变化伊红美蓝培养基\n任务3选择培养基的应用实例(1)选择培养基是在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长，其目的是培养、分离出特定微生物。(2)选择培养基的应用实例①加入某些特定的物质(前提是培养基具备全部营养成分)\n②改变培养基的营养成分\n③利用培养基“特定化学成分”分离\n④通过某些“特殊环境”分离\n[归纳拓展]自养型与异养型微生物培养基的区别(1)自养型微生物所需的主要营养物质是无机盐，碳源可来自大气中的CO2，氮源也可由含氮无机盐提供。(2)异养型微生物所需的营养物质主要是有机物，即碳源必须由含碳有机物提供，氮源也主要是由有机物提供的，部分异养型微生物也可以利用无机氮源。\n任务4比较两种微生物计数方法比较项目间接计数法(稀释涂布平板法)直接计数法(显微计数法)原理当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的____个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌利用特定细菌计数板或________计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量一血细胞\n公式每克样品中的菌落数＝C/V×M。C：某稀释度下平板上生长的平均菌落数，V：涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M：稀释倍数每毫升原液所含细菌数：每小格内平均细菌数×400×104×稀释倍数缺点当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是____个菌落不能区分细胞____结果比实际值偏____比实际值偏____一死活小大\n[名师提醒](1)一般选用相差不大的平板计算平均值，选用保证菌落数在30～300的稀释度下的平板进行计数。(2)设置重复组，增强实验的说服力与准确性。同时为了保证结果准确，设置三个以上。(3)在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目，如果某个平板的菌落数与其他组差别甚远，说明该平板操作过程中出现失误，应舍弃。(4)统计的菌落往往比活菌的实际数目低，这是由于当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此，统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。\n考向分类·对点落实考向一微生物分离与计数的考查1.(不定项选择)用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，对该实验有关叙述错误的是()A．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是210、240和250，取平均值233B．涂布了一个平板，统计的菌落数是230C．设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度D．统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数估计值答案：BD\n解析：该实验中，至少要涂布3个平板，选择菌落数在30～300的平板进行计数，求平均值，A正确；没有设置重复组，结果不具有说服力，B错误；设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度，C正确；统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5，首先选择菌落数在30～300的平板进行计数，然后求平均值，D错误。\n2．土壤中含有多种微生物，某研究小组欲分离能在Fe2＋污染的土壤环境下生存的希瓦氏菌，进行了相关研究。回答下列问题：(1)配制培养基：加入牛肉膏、蛋白胨、琼脂、NaCl、H2O及__________________等并灭菌；该培养基按功能划分，属于_____培养基。(2)分离希瓦氏菌：将10g土样溶于90mL蒸馏水中，再稀释成多个倍数，取多个稀释倍数的土壤样品液0.1mL分别接种到多个平板上，这样做的目的是_____________________________________________；培养一段时间后，A、B研究员在105稀释倍数下得到的结果：A涂布4个平板，统计的菌落数分别是150、178、259、310；B涂布4个平板，统计的菌落数分别是152、165、175、184，则每克土壤样品中的希瓦氏菌数量最可能为________个。含高浓度Fe2＋的溶液选择获得菌落数量合适的平板，排除偶然因素造成的误差1.69×108\n解析：(1)本实验目的是分离能在Fe2＋污染的土壤环境下生存的希瓦氏菌，所以在培养基中添加含高浓度Fe2＋的溶液，这属于选择培养基。(2)取多个稀释倍数的土壤样品液0.1mL分别接种到多个平板上，这样做的目的是获得菌落数量合适的平板，排除偶然因素造成的误差；每克土壤样品中的希瓦氏菌的数目为×105＝1.69×108(个)。\n(3)进一步纯化希瓦氏菌：采用平板划线法接种培养一段时间后，发现第一划线区域上都不间断地长满了菌落，第二划线区域上几乎无菌落，分析出现此现象的原因可能是____________________________________________(答出两点)。(4)研究人员还欲采用测定ATP含量的方法估算希瓦氏菌数，该方法的依据是___________________________________________，此方法与显微镜直接计数相比，得到的希瓦氏菌数目____(填“多”或“少”)，原因是______________________________________。接种环灼烧后未冷却就划线；未从第一区域末端开始划线活细胞都能产生ATP且含量稳定，因此可用于估算数目少显微镜直接计数统计中包括死细胞和活细胞\n解析：(3)第一划线区域上都不间断地长满了菌落，第二划线区域上几乎无菌落，可能是因为接种环灼烧后未冷却就划线(将菌种全部杀死)、未从第一区域末端开始划线(未接种菌种)。(4)活细胞都需要ATP提供能量且含量稳定，所以可以采用测定ATP含量的方法估算希瓦氏菌数；由于死的细菌不能产生ATP，显微镜直接计数统计中包括死细胞和活细胞，所以该方法得到的希瓦氏菌数目少。\n3．[全国卷Ⅱ]为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题：(1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是________________________；然后，将1mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为_______。(2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌，操作时，接种环通过_____灭菌。在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是____________________________________。检测培养基平板灭菌是否合格3.8×107灼烧将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落\n解析：(1)为了确定培养基的灭菌是否合格，应通过随机取若干灭菌后的空白平板培养一段时间，观察培养基上是否有菌落生长，用来进行对照。三个培养基上平均菌落数为38，所以每升水样中活菌数为38×10×100×1000＝3.8×107。(2)接种环应用灼烧法进行灭菌。在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线，这样做的目的是：随着划线次数的增加，使每次划线时菌体的数目逐渐减少，以便得到单个菌落。\n(3)示意图A和B中，____表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液中__________的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高_________的利用率。B溶解氧(氧气)营养物质\n解析：(3)A表示平板划线法接种培养后得到的结果，B表示稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。\n考向二微生物筛选的拓展应用4.营养缺陷型菌株是指缺乏合成某些营养物质(如氨基酸、维生素)的能力，必须在基本培养基中补充特殊营养物质才能正常生长的一类菌株，可自然产生或人工诱导获得。用一定方法诱变大肠杆菌并将其接种到甲培养皿上，一段时间后将菌落影印接种(不改变菌落位置)到乙、丙两培养皿中，进一步培养一段时间可筛选出营养缺陷型菌株，结果如图所示。\n下列说法正确的是()A．将大肠杆菌接种到甲培养皿的方法为平板划线法B．甲、丙两种培养基中均添加了特殊营养物质C．乙培养皿中能生长的为所需的营养缺陷型菌株D．甲中的部分大肠杆菌发生了基因突变或染色体变异答案：B解析：由菌落的分布情况可知，将大肠杆菌接种到甲培养皿的方法为稀释涂布平板法，A错误；根据甲、丙两种培养基中菌落位置可知，甲中的菌种在丙培养基中均能生长，再结合乙培养基中菌落的生长情况，可推测甲培养基和丙培养基都添加了某种特殊物质，B正确；乙培养皿中不能生长的为所需的营养缺陷型菌株，C错误；甲中的部分大肠杆菌发生了基因突变，不可能发生染色体变异，因为大肠杆菌不含染色体，D错误。\n5.[2022·德州检测](不定项选择)筛选淀粉分解菌需使用以淀粉为唯一碳源的培养基。接种培养后，得到如图所示的两个菌落，培养平板经稀碘液处理，出现了以菌落为中心的透明圈。相关叙述正确的是()A．培养基中的淀粉也可为微生物提供氮源B．两个菌落中的微生物为同一种微生物C．两个菌落中的微生物均能将淀粉酶分泌至细胞外D．透明圈直径与菌落直径的比值越大，说明该微生物分解淀粉的能力越大答案：CD\n解析：培养基中的淀粉能为微生物提供碳源，不能提供氮源，A错误；能够水解淀粉的微生物不一定是同一种微生物，B错误；据图分析可知，两个菌落均产生了透明圈，说明两个菌落中的微生物均能将淀粉酶分泌至细胞外，C正确；透明圈直径与菌落直径的比值越大，微生物分解淀粉能力越强，该值的大小反映了两个菌落中的微生物分解淀粉能力的差异，D正确。\n6．酸奶因营养丰富和口感美味而深受大众喜爱，且含有活性乳酸菌，对身体大有益处。常见的乳酸菌主要为乳杆菌属、双歧杆菌属和嗜热链球菌属。现采用如下步骤对酸奶中的乳酸菌进行筛选、分离：酸奶→选择适宜稀释度→涂布MRS琼脂培养基→适宜温度培养→挑取单个菌落→接种于MRS琼脂平板或MC琼脂平板→菌种鉴定→接种MRS液体培养基→菌种保藏请回答下列有关问题：\n(1)制备MRS琼脂培养基时，采用____________法灭菌15～20min。倒平板操作时，应在____________附近进行。(2)制备稀释液时，先将酸奶样品充分摇匀，用无菌吸管吸取样品___mL放入装有225mL无菌水锥形瓶中，充分振荡，制成1∶10的样品液。(3)培养一段时间后，从MRS固体培养基上挑选多个单菌落，使用_________法接种于MC琼脂平板或MRS琼脂平板上，于36±1℃______(填“厌氧”或“好氧”)条件下倒置培养48h后，再挑取单个菌落进行菌种鉴定。(4)菌种鉴定后将其接种至MRS液体培养基的目的是______________________。将得到的纯菌株进行长期保藏，可采用________的方法。高压蒸汽灭菌酒精灯的火焰25平板划线厌氧扩大培养，增加菌种数目甘油管藏\n解析：(1)培养基常用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。倒平板操作时，应在酒精灯的火焰附近进行。(2)制成1∶10的样品液时，先将酸奶样品充分摇匀，用无菌吸管吸取样品25mL放入装有225mL无菌水锥形瓶中，充分振荡。(3)培养一段时间后，从MRS固体培养基上挑多个单菌落，使用平板划线法接种于MC琼脂平板或MRS琼脂平板上；乳酸菌是厌氧菌，因此应该置于36±1℃厌氧条件下倒置培养48h后，再挑取单个菌落进行菌种鉴定。(4)菌种鉴定后将其接种至MRS液体培养基的目的是扩大培养，增加菌种数目。长期保藏菌种可采用甘油管藏法。\n课堂总结\n[网络建构提升]平板划线稀释涂布平板分离计数纤维素分解菌\n[长句应答必备]1．无菌操作技术包括消毒和灭菌，消毒包括煮沸消毒、巴氏消毒、化学药剂消毒和紫外线消毒等；灭菌包括灼烧灭菌、干热灭菌和湿热灭菌。2．培养基的制备过程包括计算、称量、溶化、灭菌、倒平板等步骤，倒置平板的目的是防止培养皿盖上的水滴落入培养基造成污染。3．大肠杆菌的纯化包括平板划线法和稀释涂布平板法。平板划线法要求多次划线，稀释涂布平板法要求将菌液充分稀释。4．微生物的计数要求制作多个平板，且每个平板上能长出30～300个菌落。5．尿素分解菌和纤维素分解菌的分离都运用了选择培养基，前者所用的培养基中尿素是唯一的氮源，后者所用的培养基中纤维素是唯一的碳源。\n历届真题\n[等级选考研考向]1．[浙江卷]下列关于微生物培养及利用的叙述，错误的是()A．利用尿素固体培养基可迅速杀死其他微生物，而保留利用尿素的微生物B．配制培养基时应根据微生物的种类调整培养基的pHC．酵母菌不能直接利用糯米淀粉发酵得到糯米酒D.适宜浓度的酒精可使醋化醋杆菌活化答案：A\n解析：利用尿素固体培养基筛选尿素分解菌时，尿素固体培养基并不直接杀死其他微生物，而是其他微生物不能以尿素为氮源，无法在尿素固体培养基中存活，A错误；不同的微生物生长所需的最适pH不同，如细菌适宜生活在中性偏碱环境，霉菌适宜生活在中性偏酸环境，因此配制培养基时应根据微生物的种类调整培养基的pH，B正确；利用糯米酿酒需要先进行糖化，酵母菌不能直接利用淀粉进行发酵，C正确；醋化醋杆菌的发酵底物为一定浓度的酒—水混合物，适宜浓度的酒精可使醋化醋杆菌活化，D正确。\n2．[2021·湖南卷，节选]大熊猫是我国特有的珍稀野生动物，每只成年大熊猫每日进食竹子量可达12～38kg。大熊猫可利用竹子中8%的纤维素和27%的半纤维素。研究人员从大熊猫粪便和土壤中筛选纤维素分解菌。回答下列问题：(1)为筛选纤维素分解菌，将大熊猫新鲜粪便样品稀释液接种至以________为唯一碳源的固体培养基上进行培养，该培养基从功能上分类属于_____培养基。(2)配制的培养基必须进行灭菌处理，目的是___________________________________________。检测固体培养基灭菌效果的常用方法是______________________。(3)简要写出测定大熊猫新鲜粪便中纤维素分解菌活菌数的实验思路_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。纤维素选择为了杀死培养基中的所有微生物(微生物和芽孢、孢子)不接种培养(或空白培养)将大熊猫新鲜粪便样液稀释适当倍数后，取0.1mL涂布到若干个平板(每个稀释度至少涂布三个平板)，对菌落数在30～300的平板进行计数，则可根据公式推测大熊猫新鲜粪便中纤维素分解菌活菌数\n解析：(1)在用纤维素作为唯一碳源的培养基中，纤维素分解菌能够很好地生长，其他微生物则不能生长。为筛选纤维素分解菌，将大熊猫新鲜粪便样品稀释液接种至以纤维素为唯一碳源的固体培养基上进行培养；培养基从功能上分类可分为选择培养基和鉴别培养基，故该培养基从功能上分类属于选择培养基。(2)配制的培养基常用高压蒸汽灭菌，即将培养基置于压力100kPa、温度121℃条件下维持15～30分钟，目的是为了杀死培养基中的所有微生物(微生物和芽孢、孢子)。为检测灭菌效果可对培养基进行空白培养，即将未接种的培养基在适宜条件下培养一段时间，若在适宜条件下培养无菌落出现，说明培养基灭菌彻底，否则说明培养基灭菌不彻底。(3)为测定大熊猫新鲜粪便中纤维素分解菌活菌数，常采用稀释涂布平板法，在适宜的条件下对大熊猫新鲜粪便中纤维素分解菌进行纯化并计数时，对照组应该涂布等量的无菌水。将大熊猫新鲜粪便样液稀释适当倍数后，取0.1mL涂布到若干个平板(每个稀释度至少涂布三个平板)，对菌落数在30～300的平板进行计数，则可根据公式推测大熊猫新鲜粪便中纤维素分解菌活菌数。\n(4)为高效降解农业秸秆废弃物，研究人员利用从土壤中筛选获得的3株纤维素分解菌，在37℃条件下进行玉米秸秆降解实验，结果如表所示。在该条件下纤维素酶活力最高的是菌株_____，理由是__________________________________________。菌株秸秆总重(g)秸秆残重(g)秸秆失重(%)纤维素降解率(%)A2.001.5124.5016.14B2.001.5323.5014.92C2.001.4229.0023.32C接种C菌株后秸秆失重最多，纤维素降解率最大\n解析：(4)测定酶活力时可以用单位时间内、单位体积中反应物的减少量或产物的增加量来表示。由表格可知，在适宜的条件下，C菌株在相同的温度和时间下，秸秆失重最多，纤维素降解率最大，说明该菌株的纤维素分解菌产生的纤维素酶活力最大。\n3.[2020·江苏卷]产脂肪酶酵母可用于含油废水处理。为筛选产脂肪酶酵母菌株，科研人员开展了相关研究。请回答下列问题：(1)常规微生物实验中，下列物品及其灭菌方法错误的是___(填编号)。编号①②③④物品培养基接种环培养皿涂布器灭菌方法高压蒸汽火焰灼烧干热臭氧④解析：(1)涂布器一般用干热灭菌法或灼烧灭菌法进行灭菌。\n(2)称取1.0g某土壤样品，转入99mL无菌水中，制备成菌悬液，经________后，获得细胞密度不同的菌悬液。分别取0.1mL菌悬液涂布在固体培养基上，其中10倍稀释的菌悬液培养后平均长出了46个酵母菌落，则该样本中每克土壤约含酵母菌________________个。(3)为了进一步提高酵母菌产酶能力，对分离所得的菌株，采用射线辐照进行_____育种。将辐照处理后的酵母菌涂布在以____________为唯一碳源的固体培养基上，培养一段时间后，按照菌落直径大小进行初筛，选择直径______的菌落，纯化后获得A、B两突变菌株。梯度稀释4.6×105(或460000)诱变脂肪(或油脂)较大\n解析：(2)99mL无菌水中加入1.0g土壤制成的菌悬液为100mL，取稀释10倍后的菌悬液0.1mL涂布平板，平板上的平均菌落数为46，则每克土壤约含酵母菌46×100×10÷0.1＝4.6×105(个)。(3)辐射可以提高基因突变的频率，利用射线辐照进行的育种为诱变育种。本实验的目的是筛选产脂肪酶的菌株，所用的培养基应该以脂肪(或油脂)为唯一碳源；最终形成的菌落直径越大，形成该菌落的菌株分解脂肪(或油脂)的能力越强，生产脂肪酶的能力也越大。\n(4)在处理含油废水的同时，可获得单细胞蛋白，实现污染物资源化。为评价A、B两菌株的相关性能，进行了培养研究，结果如图。据图分析，应选择菌株___进行后续相关研究，理由是______________________________________________________。B该菌株增殖速度快，单细胞蛋白产量高；降解脂肪能力强，净化效果好\n解析：(4)由图可知，相对于菌株A，菌株B的增殖速度更快，降解脂肪的能力更强。根据题干信息“在处理含油废水的同时，可获得单细胞蛋白”可进一步推知菌株B处理含油废水时可得到更多的单细胞蛋白，故菌株B更适合作为后续研究的材料。\n[国考真题研规律]4．[2020·全国卷Ⅰ，37]某种物质S(一种含有C、H、N的有机物)难以降解，会对环境造成污染，只有某些细菌能降解S。研究人员按照下图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解S的细菌菌株。实验过程中需要甲、乙两种培养基，甲的组分为无机盐、水和S，乙的组分为无机盐、水、S和Y。\n回答下列问题：(1)实验时，盛有水或培养基的摇瓶通常采用____________的方法进行灭菌。乙培养基中的Y物质是_____。甲、乙培养基均属于______培养基。(2)实验中初步估测摇瓶M中细菌细胞数为2×107个/mL，若要在每个平板上涂布100μL稀释后的菌液，且保证每个平板上长出的菌落数不超过200个，则至少应将摇瓶M中的菌液稀释____倍。(3)在步骤⑤的筛选过程中，发现当培养基中的S超过某一浓度时，某菌株对S的降解量反而下降，其原因可能是___________________________________(答出1点即可)。高压蒸汽灭菌琼脂选择104S的浓度超过某一值时会抑制菌株的生长\n解析：(1)实验时，盛有水或培养基的摇瓶常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。题图中摇瓶M内装有液体培养基甲，培养皿中的培养基乙为固体培养基，相比甲需添加凝固剂Y为琼脂。依据题干信息，甲、乙培养基均为以S(一种含有C、H、N的有机物)为唯一氮源和碳源的培养基，可抑制或阻止其他微生物繁殖，仅使能够降解和利用S的菌株生长和繁殖，故属于选择培养基。(2)若使平板上长出的菌落数不超过200个，则接种液中的菌体浓度至多为200个/0.1mL＝2×103个/mL，已知摇瓶M中的细菌细胞数为2×107个/mL，则至少应将摇瓶M中的菌液稀释104倍。(3)S作为一种营养物质，在培养基中浓度过高，可导致培养液渗透压升高，细菌细胞渗透失水，使其代谢速率下降；另一方面S作为污染物，其浓度过高可能抑制菌体生长、代谢和繁殖。\n(4)若要测定淤泥中能降解S的细菌细胞数，请写出主要实验步骤：_______________________________________________________。(5)上述实验中，甲、乙两种培养基所含有的组分虽然不同，但都能为细菌的生长提供4类营养物质，即________________________。取淤泥加入无菌水中，涂布(或稀释涂布)到乙培养基上，培养后计数水、碳源、氮源和无机盐解析：(4)若要测定淤泥中能降解S的细菌细胞数，需进行的实验步骤如下：称取一定质量(10g)的淤泥溶于一定体积的(90mL)无菌水中，制备土壤浸出液，经梯度稀释(对于细菌，一般选用104、105、106倍的稀释液)后，采用稀释涂布平板法接种于以S为唯一碳源和氮源的固体培养基(即乙培养基)中，每个稀释倍数下设置三组重复实验；在适宜条件下培养，待长出菌落且菌落数目达到稳定后，选取菌落数在30～300的平板进行计数，统计并计算平均值。(5)在甲、乙两种培养基中，S既作为碳源，又作为氮源，同时培养基中还含有水、无机盐等营养物质。\n5．[全国卷Ⅰ]已知一种有机物X(仅含有C、H两种元素)不易降解，会造成环境污染。某小组用三种培养基筛选土壤中能高效降解X的细菌(目标菌)。Ⅰ号培养基：在牛肉膏蛋白胨培养基中加入X(5g/L)。Ⅱ号培养基：氯化钠(5g/L)，硝酸铵(3g/L)，其他无机盐(适量)，X(15g/L)。Ⅲ号培养基：氯化钠(5g/L)，硝酸铵(3g/L)，其他无机盐(适量)，X(45g/L)。回答下列问题。\n(1)在Ⅰ号培养基中，为微生物提供氮源的是_______________。Ⅱ、Ⅲ号培养基中为微生物提供碳源的有机物是____。(2)若将土壤悬浮液接种在Ⅱ号液体培养基中，培养一段时间后，不能降解X的细菌比例会______，其原因是____________________________________________________。(3)Ⅱ号培养基加入琼脂后可以制成固体培养基，若要以该固体培养基培养目标菌并对菌落进行计数，接种时，应采用的方法是________________。(4)假设从Ⅲ号培养基中得到了能高效降解X的细菌，且该菌能将X代谢为丙酮酸，则在有氧条件下，丙酮酸可为该菌的生长提供______和__________________。牛肉膏、蛋白胨X下降不能降解X的细菌因缺乏碳源不能增殖，而能降解X的细菌能够增殖稀释涂布平板法能量合成其他物质的原料\n解析：(1)在Ⅰ号培养基中，牛肉膏、蛋白胨可以为微生物提供氮源，Ⅱ、Ⅲ号培养基中为微生物提供碳源的是有机物X。(2)Ⅱ号培养基中，碳源只有X，不能降解X的细菌会因缺乏碳源而不能增殖，使该类细菌比例降低。(3)利用固体培养基对菌落进行计数时，需采用稀释涂布平板法进行接种。(4)在有氧条件下，丙酮酸可被分解为CO2和H2O且释放能量，为该菌的生长提供能量和合成其他物质的原料。\n6．[全国卷Ⅱ]物质W是一种含氮有机物，会污染土壤。W在培养基中达到一定量时培养基表现为不透明。某研究小组欲从土壤中筛选出能降解W的细菌(目标菌)。回答下列问题。(1)要从土壤中分离目标菌，所用选择培养基中的氮源应该是___。(2)在从土壤中分离目标菌的过程中，发现培养基上甲、乙两种细菌都能生长并形成菌落(如图所示)。如果要得到目标菌，应该选择____菌落进一步纯化，选择的依据是_____________________________________。W乙乙菌落周围出现透明圈，说明乙菌能降解W解析：(1)要从土壤中分离能降解W的细菌，培养基中应以W为唯一氮源。(2)乙菌落周围出现透明圈，说明乙菌能降解W。\n(3)土壤中的某些微生物可以利用空气中的氮气作为氮源。若要设计实验进一步确定甲、乙菌能否利用空气中的氮气作为氮源，请简要写出实验思路、预期结果和结论，即________________________________________________________________________________。将甲、乙菌分别接种在无氮源培养基上，若细菌能生长，则说明该细菌能利用空气中的氮气作为氮源解析：(2)乙菌落周围出现透明圈，说明乙菌能降解W。(3)要判断甲、乙能否利用空气中的氮气作为氮源，应将甲、乙菌分别接种在无氮源的培养基上，观察细菌能否生长，若细菌能生长，则说明该细菌能利用空气中的氮气作为氮源，否则不能。\n(4)该小组将人工合成的一段DNA转入大肠杆菌，使大肠杆菌产生能降解W的酶(酶E)。为了比较酶E与天然酶降解W能力的差异，该小组拟进行如下实验，请完善相关内容。①在含有一定浓度W的固体培养基上，A处滴加含有酶E的缓冲液，B处滴加含有相同浓度天然酶的缓冲液，C处滴加_______，三处滴加量相同。②一段时间后，测量透明圈的直径。若C处没有出现透明圈，说明________________；若A、B处形成的透明圈直径大小相近，说明___________________________。缓冲液缓冲液不能降解W酶E与天然酶降解W的能力相近解析：(4)①实验设计应遵循单一变量原则，C处应滴加等量不含酶的缓冲液。②C处只滴加等量缓冲液，若C处没有出现透明圈，则说明缓冲液不能降解W；若A、B处形成的透明圈直径大小相近，说明酶E与天然酶降解W的能力相近。
