第36讲微生物的培养与应用及微生物的纯化技术1.下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的理解,错误的是( )A.将牛肉膏连同称量纸一起放在烧杯中加热溶化是因为牛肉膏比较黏稠B.在称量牛肉膏和蛋白胨时动作要迅速,称后要及时盖上瓶盖C.因为灭菌的目的相同,故对培养基和培养皿的灭菌方法也相同D.在加热熔化琼脂过程中要不断搅拌以防止琼脂糊底而导致烧杯破裂2.现有两种固体培养基，已知其配制时所加的成分如下表，用这两种培养基分别去分离土壤中的两种微生物，它们适于分离的是( )成分NaCl葡萄糖淀粉甲培养基含量0.02%0.02%0.02%0.01%0.5%0.5%2%乙培养基含量0.02%0.02%0.02%0.01%0.5%——A．甲培养基适于分离酵母菌；乙培养基适于分离真菌B．甲培养基适于分离异养型自生固氮菌；乙培养基适于分离自养型自生固氮菌C．甲培养基适于分离自养型自生固氮菌；乙培养基适于分离异养型自生固氮菌D．甲培养基适于分离异养型共生细菌；乙培养基适于分离异养型共生固氮菌3.下列对灭菌和消毒的理解不正确的是()A.灭菌是指杀灭环境中一切微生物的细胞、芽孢和孢子B.消毒和灭菌都是采用物理方法杀灭微生物C.接种环一般用灼烧法灭菌D.常用灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌等4.如图是平板划线示意图，划线的顺序为1→2→3→4→5，则下列说法正确的是()A.操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌B.划线操作要在火焰上进行C.在5区域中才可以得到所需菌落-9-\nD.在1，2，3，4，5区域中划线前后都要灼烧接种环5.下图是划线分离法接种微生物的示意图，下列叙述错误的是()A．该接种过程一般需灼烧接种环5次B．划线结束可看到划线末端出现不连续单菌落C．若培养的是尿素分解菌，可加入酚红指示剂D．该接种方法不能准确计数培养液中微生物数量6.为了保持菌种的纯净需要进行菌种的保藏，下列有关叙述不正确的是()A.对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法，放入－4℃的冰箱保藏B.临时保藏的菌种一般是接种到试管的固体斜面培养基上C.临时保藏的菌种容易被污染或产生变异D.对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法7.下列关于分离并检测土壤中尿素分解菌的实验操作,不正确的是()A.用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基,并用高压蒸汽灭菌法进行灭菌B.用稀释涂布平板法接种,接种操作要在酒精灯火焰附近进行C.将实验组和对照组的平板倒置,以免污染D.选择菌落数在30~300之间的实验组平板进行计数8.下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是()A.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4．7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、水B.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4．7H2O、葡萄糖、琼脂、水C.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4．7H2O、尿素、琼脂、水D.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4．7H2O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水9.如图为“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”实验示意图。据图分析下列叙述正确的是( )-9-\nA.3号试管中样品的稀释倍数为103倍B.用4号试管中稀释液进行平板培养得到的菌落平均数约为5号试管的10倍C.5号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为1.7×108个D.该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要高10.由于石油等不可再生资源供应日趋紧张,开发各种再生纤维素纤维成为获取新型纺织原料的主要渠道,而纤维素分解菌在转化可再生纤维素方面具有巨大的应用价值。下列相关叙述错误的是()A.富集纤维素分解菌时,应用固体培养基培养B.分离纤维素分解菌时,培养基中应加入适量的刚果红C.可用平板划线法对纤维素分解菌进行纯化培养D.培养纤维素分解菌时,接种后的培养基需倒置11.关于纤维素酶的叙述中，正确的是( )A．牛、羊等草食动物可以合成纤维素酶，从而利用纤维素B．纤维素酶是一种复合酶，至少包括C1酶、Cx酶和葡萄糖异构酶三种组分C．纤维素可被纤维素酶水解成葡萄糖，为微生物提供碳源、氮源等营养D．分解纤维素的细菌、真菌、放线菌，都是通过产生纤维素酶来分解纤维素的12.如图为纤维单胞菌（能产生纤维素酶）的获取过程。下列有关叙述错误的是()A.①②③④培养基都应以纤维素为唯一碳源B.图中所用培养基灭菌常用的方法是高压蒸汽灭菌法C.④所用的接种方法可对培养的微生物进行计数D.可用刚果红染料鉴定，看菌落周围是否出现透明圈13.下列关于微生物的培养与应用的叙述正确的是()-9-\nA.用涂布分离法分离细菌时,需要用接种环将菌液涂布到培养基平面上B.在尿素固体培养基上,产脲酶细菌菌落周围会出现白色的透明环带C.利用醋酸菌将果酒发酵成果醋,需要不断向发酵装置中通入无菌空气D.利用微生物进行发酵制成的泡菜美味可口,含有的成分对人体均有益14.为了减轻废弃农作物秸杆对农村环境污染,某科研小组使用如图所示接种方法分离纯化分解纤维素的微生物并将其用于生产。请据图回答下列问题：(1)图示接种方法是，所用接种工具的名称是。制备培养微生物的培养基时，灭菌与调pH的先后顺序是。(2)步骤②中，将接种工具冷却的原因是。(3)为从富含纤维素的土壤中分离获得分解纤维素的微生物的单个菌落，某同学配制了一个培养基(成分见表)：成分酵母膏无机盐淀粉纤维素粉琼脂水培养基++++++注:“+”表示有据表分析，该培养基含有微生物所需的、氮源、水、无机盐四大类营养物质。该培养基(填“能”或“不能”)用于分离纤维素分解菌，原因是。(4)对该微生物的优良菌种进行长期保存，可以采用的方法。15.纤维素酶在生物燃料制作、布料处理中起重要作用。目前,利用微生物提高纤维素酶产量是主要发展方向。如图1为用紫外线照射含有纤维素分解菌的土样,分离、培养,再检测各菌株的纤维素酶的产生量。请回答下列相关问题:-9-\n1.从自然界获取纤维素分解菌,采集土样时应选择__________的环境。2.紫外线照射的目的是__________,A0组未经紫外线处理,其作用是作为__________。3.上述培养皿中的培养基除含有水、无机盐、酵母膏、水解酪素和琼脂等外,还应有__________,目的是筛选纤维素分解菌。4.上述检测结果如图2所示。由图可知,__________组酶活力与A0组相同,最可能的原因是__________。5.若用刚果红染色法比较纤维素分解菌产生纤维素酶的量的多少,可通过观察平板培养基上以纤维素分解菌为中心的透明圈(如图3)的大小来比较,其中与A1组对应的是图中的__________。6.若要保证图3中透明圈中均为单个细胞形成的菌落,操作要求是__________。答案以及解析-9-\n1.答案：C解析：牛肉膏比较黏稠,需要放在称量纸上称量,溶化时也需要连同称量纸一起放入烧杯,A正确;由于牛肉膏和蛋白胨都容易吸潮,称取时动作要迅速,称后要及时盖上瓶盖,B正确;对培养基的灭菌常用高压蒸汽灭菌法,对培养皿的灭菌常用干热灭菌法,C错误;加入琼脂后需要熔化,此过程中要不断用玻棒搅拌,防止琼脂糊底而导致烧杯破裂,D正确。2.答案：B解析：（1）固氮菌中能独立生存的是自生固氮菌，甲培养基中含有葡萄糖和淀粉，可以作为碳源和能源，由此推出该培养基适于分离异养型的自生固氮菌；（2）乙培养基中不含有机碳源，所以可用来分离培养自养型的自生固氮菌。故选：B。3.答案：B解析：A、灭菌是指使用强烈的理化因素杀死环境中的所有微生物（包括芽孢和孢子），A正确；B、灭菌是将处理物体中的一切生物全部杀灭，在经过灭菌后的物体中，不再存在任何活着的生命；消毒是将物体中的微生物减少到不再危害人体（或其他需要保护的生物体）的程度，所采用的方法有物理的或化学的，B错误；C、金属接种工具常用灼烧法灭菌，C正确；D、微生物的培养过程中常用的灭菌方法有灼烧法、干热灭菌法、高压蒸气灭菌法，D正确．故选：B．4.答案：D解析：操作前要将接种环放在酒精灯的外焰进行灼烧灭菌；整个操作过程要在酒精灯火焰旁进行；1、2、3、4、5这五个区域都可能有所需菌落；在每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束时接种环上残留的菌种，划线结束后灼烧接种环是为了杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。故选：D。5.答案：B解析：6.答案：A解析：A.对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法，放在4℃的冰箱中保藏，A错误；B.临时保藏的菌种一般就是接种到试管的固体斜面培养基上保存，B正确；-9-\nC.临时保藏的菌种容易被污染或产生变异，所以每3-6个月要重新将菌种从旧的培养基上转移到新培养基上培养，C正确；D.对于需要长期保存的菌种，用甘油管藏的方法，放在低温-20℃的冷冻箱中保存，D正确。7.答案：A解析：本题考查分离土壤中尿素分解菌的实验。分离土壤中的尿素分解菌，所用培养基要以尿素为唯一氮源，不能用牛肉膏蛋白胨培养基，A错误；稀释涂布平板法接种时，要在酒精灯火焰附近操作，因为酒精灯火焰附近无菌，B正确；将实验组和对照组的平板倒置，可以避免水滴入培养基中造成污染，C正确；计数时要选择菌落数在30~300之间的实验组平板，D正确。8.答案：A解析：所用选择培养基的基本要求是满足分解尿素的细菌的生长条件，抑制或阻止其他微生物的生长，且尿素是唯一的氮源，葡萄糖可以作为碳源，因此A正确；B选项缺少尿素，错误；C选项缺少葡萄糖作为碳源，错误；D选项中缺少尿素，且牛肉膏、蛋白胨也可提供氮源，错误。综上，A正确，B、C、D均错。9.答案：B解析：将10g土样加入到90mL无菌水中后,土样稀释10倍,再经3次10倍稀释得到3号试管中的样品,故3号试管中样品的稀释倍数是104倍,A错误;4号试管中稀释液进行平板培养,其稀释倍数为5号试管的10倍,如果稀释倍数适当,操作等正确,其得到的菌落平均数可能是5号的10倍,B正确;5号试管进行稀释涂布平板法计数的结果表明,每克土壤中的菌株数为(168+175+167)÷3÷0.1×106=1.7×109(个),),C错误;稀释涂布平板法得到的菌落可能存在两个或多个细菌长成一个菌落的情况,因此该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要低,D错误。10.答案：A解析：在分离出纤维素分解菌之前，需对微生物进行富集培养，此时应用液体培养基，利于培养液与微生物充分接触，加速微生物繁殖，A错误；在分离纤维素分解菌时，培养基以纤维素作为唯一碳源，且应加入刚果红染液，B正确；对纤维素分解菌进行纯化培养时，可采用平板划线法或稀释涂布平板法，C正确；接种后，为防止皿盖上凝结的水珠滴落在培养基上造成培养基污染，应将培养基进行倒置培养，D正确。11.答案：D解析：12.答案：C-9-\n解析：培养基中以纤维素作为唯一碳源时，只有能利用纤维素的微生物才能生长繁殖，从而筛选出纤维素分解菌，A正确；对培养基灭菌常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌，对接种环常采用火焰灼烧法进行灭菌，B正确；④的接种方法是平板划线法，利用平板划线法可对微生物进行接种、纯化、分离，但是不能对微生物进行计数，计数一般采用稀释涂布平板法，C错误；刚果红可以与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现透明圈，因此可通过是否产生透明圈来鉴定纤维素分解菌，D正确。13.答案：C解析：用涂布分离法分离细菌时，所用的涂布工具是玻璃刮刀，A错误；在尿素固体培养基上，产脲酶细菌菌落周围会出现红色环带，因为细菌产生的脲酶催化尿素分解产生了氨，导致培养基呈碱性，培养基中的酚红指示剂遇碱性条件会变红，B错误；醋酸菌在有氧条件下才能将乙醇氧化成醋酸，所以利用醋酸菌将果酒发酵成果醋，需要不断向发酵装置中通入无菌空气，C正确；利用微生物进行发酵制成的泡菜中含有一定量的亚硝酸盐，其对人体是有害的，D错误。14.答案：（1）平板划线法；接种环；先调pH再灭菌（2）避免烫死接种菌种（3）碳源；不能；纤维素不是唯一碳源（4）甘油管藏解析：（1）图中采用的接种方法是平板划线法，其所用的接种工具是接种环；制备培养微生物的培养基时，应先调pH再灭菌。（2）步骤②中，将接种工具冷却的目的是避免烫死接种菌种。（3）各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。据表分析，该培养基含有碳源、氮源、水、无机盐。分离纤维素分解菌的培养基应该以纤维素为唯一碳源，而该培养基中的碳源除了纤维素粉还有酵母膏、淀粉，因此不能用于分离纤维素分解菌。（4）长期保存菌种应该采用甘油管藏法。15.答案：1.富含纤维素;2.诱发基因突变，提高突变频率，获得高产纤维素酶的纤维素分解菌;对照组3.纤维素;4.A5;没有发生基因突变5.④;6.菌液稀释度足够高，使纤维素分解菌分散成单个细胞-9-\n解析：1.筛选纤维素分解菌时应从富含纤维素的环境中取样。2.图1中紫外线照射的目的是诱发基因突变,提高突变频率,获得高产纤维素酶的纤维素分解菌A0组未经紫外线处理,其作用是作为对照组.3.筛选纤维素分解菌时需要使用以纤维素为唯一碳源的选择培养基。4.据图2分析,A5组酶活力与A0组相同,最可能的原因是其中的纤维素分解菌没有发生基因突变。5.图3中,④的透明圈最大,分解纤维素的能力最强,相当于图2中的A1组。6.菌液稀释度足够高时,纤维素分解菌可以分散成单个细胞,可以保证图3透明圈中均为单个细胞形成的菌落。-9-
